新的鼻咽癌候选肿瘤抑制基因UBE2L6失活及抑癌作用的分子机制研究

我们的前期研究通过高通量筛选发现鼻咽癌（NPC）细胞中UBE2L6基因可能存在启动子区域CpG岛DNA异常甲基化；且鼻咽癌组织及细胞中均存在UBE2L6转录表达下调/缺失，但UBE2L6转录失活的具体机制及其NPC发病中的作用仍不清楚。为此，本研究首先分析NPC中UBE2L6表达缺失/下调与等位基因丢失、基因突变及启动子区域DNA甲基化的关系；然后采用基因克隆转染技术和siRNA 技术分别建立表达UBE2L6的NPC细胞系和敲除UBE2L6的 NP69 正常鼻咽上皮细胞系，分析UBE2L6表达上调对NPC细胞的恶性生物学行为的影响以及UBE2L6表达缺失对正常鼻咽上皮细胞的恶性转化作用，以期明确UBE2L6在鼻咽癌中转录失活的可能原因、并阐明该基因的部分肿瘤生物学功能及其对鼻咽癌细胞潜在抑瘤作用可能的分子机制。为鼻咽癌诊治提供新的分子标志物和治疗靶标。

鼻咽癌中肿瘤抑制基因的表观遗传学改变更为普遍，其肿瘤抑制基因的高甲基化改变参与了细胞周期调控，DNA修复，细胞凋亡，细胞粘附，细胞骨架重整及肿瘤的浸润转移的全过程。因此，探索表观遗传调控的相关的肿瘤抑制基因有助于进一步深入了解鼻咽癌的发生发展，并可能发现新的诊断和治疗的策略。在前期工作中，我们通过高通量cDNA表达谱芯片建立了鼻咽癌的甲基化谱。其中，UBE2L6基因在鼻咽癌细胞株中表达下调，去甲基化转移酶抑制剂联合去乙酰化酶抑制剂可上调其转录水平约10倍。UBE2L6基因编码UBCH8蛋白，参与泛素化及ISG化修饰。在本研究中，我们证实UBE2L6基因在鼻咽癌中因其DNA启动子区CpG岛发生高甲基化改变而导致其转录失活；UBCH8蛋白在鼻咽癌中表达降低，与鼻咽癌患者的不良预后有关。通过一系列体外功能研究验证，发现外源性表达UBE2L6基因可抑制鼻咽癌细胞的克隆形成及增殖能力，并诱导细胞发生凋亡。我们的数据提示UBE2L6基因是鼻咽癌的肿瘤抑制基因，这也是首次发现UBE2L6基因是人类肿瘤相关瘤抑制基因。