TMP21基因转录调控及其对胰腺肿瘤细胞凋亡和增殖活性影响的分子机制

TMP21 is a new member of p24 protein cargo families with a type I transmembrane protein topology with a large luminal domain. It can regulate Aβ expression in Aidzhimer's disease. Meanwhile TMP21 will specifically interacts with Cysteine-rich (C1) domains, present in PKC isozymes, and then translocate in cells, which will affect tumor cell apoptosis. Our experiment results showed that 3300 base pair DNA domain upstream of the first exon 5' end of TMP21 gene has promoter activity. We identified that nuclear factor of activated T-cells (NFAT) is a transcriptional factor regulating TMP21 gene expression. Transcriptional activity of TMP21 promoter was also increased by nuclear factor-kappaB (NF-kB). Meanwhile TMP21 protein expression was higher in pancreatic tumor tissue than that in normal tissue. Our hypothesis is: a promoter of TMP21 is located in 3300 base pair fraqment, NFAT and NF-kB are the transcriptional factors of TMP21 gene. NFAT and NF-kB have a role in carcinogenesis via regulating TMP21 eapression. We design a series experiments to identify whether NF-kB is a cis-acting response elements for TMP21 promoter, to regulate TMP21 expression via changing NFAT and NF-kB level in cell. We will also investigate the effect of NFAT and NF-kB on modulating TMP21 promoter transcriptional activity, to measure TMP21 protein expression and its role on tumor cell proliferating activity and apoptosis. It will be a groundwork to define the molecular mechanism role of TMP21 in carcinogenesis.

TMP21是p24转运膜蛋白成员之一，对细胞内蛋白膜转运起重要作用，可调节Aidzhimer病毒性蛋白Aβ的表达；还可通过特异性与PKC等酶C1区锚定结合后在细胞内转位，从而影响肿瘤细胞凋亡的发生。我们已证实该基因的启动子活性片段，确定了其转录起始位点TSS,鉴定NFAT为TMP21的转录因子,并发现NF-κB能增加TMP21启动子转录活性。同时我们发现在胰腺肿瘤组织中TMP21表达有增加。推测NFAT、NF-κB为TMP21基因转录因子，两转录因子通过调节TMP21在肿瘤发生过程中起作用。我们拟鉴定该启动子调节元件NF-κB，并通过改变NFAT、NF-kB表达调控TMP21基因蛋白在细胞内的表达。研究NFAT、NF-κB通过调节TMP21启动子的转录活性改变TMP21蛋白表达,从而影响肿瘤细胞增殖生长和凋亡发生，为研究TMP21基因蛋白在肿瘤发生发展过程中的分子机制奠定基础。

TMP21是p24转运膜蛋白成员之一，对细胞内蛋白膜转运起重要作用，可调节Aidzhimer病毒性蛋白Aβ的表达；还可通过特异性与PKC等酶C1区锚定结合后在细胞内转位，从而影响肿瘤细胞凋亡的发生。为观察TMP21对胰腺肿瘤的影响，我们构建了TMP21 稳定过表达和干扰的胰腺癌细胞株，然后检测其对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响，我们发现改变TMP21的表达对胰腺癌细胞的增殖和凋亡影响不大，但是我们发现改变TMP21对自噬的关键分子P62有较大影响，这提示TMP21可能通过自噬来影响胰腺癌细胞的功能。.为研究TMP21在正常人体组织中的表达，我们收集了19例死于交通事故的正常成年人组织，并用IHC，western blot和RT-PCR的检测所有组织TMP21的表达。 结果显示TMP21的表达在心脏，肝，肺，肾和肾上腺中处于高水平; 脑，胰腺，前列腺，睾丸，小肠，结肠，胃，胆囊，甲状腺和气管中的中等水平; 低水平的骨骼肌，皮肤和淋巴结。. γ分泌酶抑制剂（GSI）已经在实体瘤患者中证明了临床活性。我们假设细胞毒性化疗多柔比星以抑制细胞增殖的组合与GSI一起将导致比单独的单一疗法更有效的结果。我们用多柔比星治疗MDA-MB-231细胞系，并在体外和体内评价单一疗法的效力和与GSI的组合。这项研究证明了联合使用GSI和多柔比星的实用性。.在过去十年中，越来越多的证据已经显示lncRNA在肿瘤形成和肿瘤抑制中起重要作用;然而，lncRNAs在TNBC中的作用知之甚少。为了解决这个问题，我们使用Agilent lncRNA芯片芯片和生物信息学工具，包括Gene Ontology（GO）和the Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）分析，以评估lncRNA在3对TNBC组织中的表达。我们发现新型基因间lncRNA LINC00993的表达水平和TNBC有关。.RNAscope表示RNA原位杂交（ISH）方法的改进并且允许基因在组织中可见表达，在本研究中，我们通过RT-qPCR用RNAscope评估ERαmRNA，然后与IHC比较。我们发现一些ERαIHC- 基于阴性和基于RNAscope的阳性检测结果在用IHC测试后被检测为阳性。我们的发现表明RNAscope可以是用于改善患者ERα状态的检测的补充方法，并且具有潜在的临床效用。