识别序列外甲基化对限制性内切酶活性的抑制作用及机理

本项目在国际首次探讨了识别序列外DNA甲基化对限制性核酸内切酶活性抑制及可能的分子机理。应用PCR定点诱变技术在内切酶识别序列外邻近不同部位导入甲基化位点。酶切动力学实验和结果表明：外甲基化的抑制作用与外甲基化碱基的位置及数目呈量的对应关系。双侧，单侧第一和第二邻位外甲基化抑制效率依次约为90%、70%和30%，去除外甲基化位点后抑制效率为0'。据此认为，外甲基化很可能是通过影响了酶和底物相互作用时的构象而发生抑制作用，这很可能是生物体的一种适应性调节功能。本结果为内切酶酶切动力学研究引入一个新的底物结构参数，拓宽了甲基化的研究领域，为进一步揭示甲基化作用在生命活动中的重要性提供了新的线索。