JAK2磷酸化PBK/TOPK Tyr74位点在伯基特淋巴瘤中的作用研究

Burkitt’s lymphoma is a highly aggressive B-cell non-Hodgkin lymphoma and the fastest growing human tumor. Though the current treatment is effective for most of patients, there is still a portion of patients cannot be cured. We found that nearly 100% of the Burkitt’s lymphoma tumor cells are positive for PBK/TOPK and active form phospho-JAK2, JAK2 can bind PBK/TOPK in Burkitt’s lymphoma cells, and JAK2 can phosphorylate the Tyr74 site of PBK/TOPK. Based on the important role of PBK/TOPK in the cell cycle G2/M phase, we hypothesized that the interaction of JAK2 and PBK/TOPK may play an important role in the proliferation of Burkitt’s lymphoma, and may mediate the cross-talk of JAK-STAT pathway and MAPK pathway, JAK2 and PBK/TOPK are promising molecular targets of Burkitt’s lymphoma treatment. This project will focus on exploring the role of JAK2 - PBK/TOPK interaction in the proliferation of Burkitt’s lymphoma, the downstream protein of the interaction, and the application of JAK2 and PBK/TOPK inhibitor in the treatment of Burkitt’s lymphoma.

伯基特淋巴瘤是一种B细胞非霍奇金淋巴瘤，增殖快、倍增时间短，应用目前的各种治疗方案仍有部分患者没有很好的疗效。我们前期研究工作发现与增殖相关的蛋白激酶JAK2和PBK/TOPK在大部分伯基特淋巴瘤中激活或高表达，JAK2可以结合PBK/TOPK，并能够磷酸化PBK/TOPK的Tyr74位点，表明二者的相互作用可能在伯基特淋巴瘤的增殖中起到重要作用，PBK/TOPK可能是淋巴因子-JAK-STAT信号途径与MAPK途径之间相互作用的关键点，JAK2和PBK/TOPK也可能是伯基特淋巴瘤治疗新的分子靶点。本课题拟采用分子生物学和动物实验的方法，探究JAK2磷酸化PBK/TOPK的相互作用对伯基特淋巴瘤增殖的影响以及二者相互作用的下游分子，研究这两种蛋白激酶是否可以作为治疗伯基特淋巴瘤的靶向分子。

Burkitt淋巴瘤是一种高度恶性的B细胞非霍奇金淋巴瘤, 其特点为恶性程度高，生长速度快。TOPK最早分离自淋巴因子激活的杀伤性T细胞(T-LAK 细胞)cDNA消减杂交文库，与Ki-67类似，在细胞有丝分裂中具有重要作用，是MAPK途径中的一个重要环节。而JAK2-STAT途径主要为淋巴因子作用的信号途径。JAK2和PBK/TOPK均为淋巴组织增生中非常关键的蛋白激酶。.我们的研究发现:（1）高临床分期、高LDH、低LMR<3.57、高IPI指数提示Burkitt淋巴瘤患者预后不良。（2）PBK/TOPK与Ki67均在反应增生淋巴结组织的生发中心大细胞表达，且表达位置一致。在Burkitt淋巴瘤中，PBK/TOPK呈弥漫强阳性表达。（3）免疫组化证实JAK2活化提示Burkitt淋巴瘤患者预后不良。（4）体外激酶试验以及COIP实验均证实JAK2可以结合PBK/TOPK并且磷酸化其Y74位点。（5）JAK2的激活剂和抑制剂可分别激活和抑制PBK/TOPK的74位点磷酸化。（6）建立Ramos空载体、野生型TOPK及TOPK Y74位点突变的三种稳转株细胞，CCK-8检测三种稳转细胞的增殖，Y74位点突变的细胞增殖明显较TOPK野生型细胞慢。.除此之外我们还对其他类型淋巴瘤进行了研究：（1）对35例A-DLBCL临床病理特征进行了研究，发现A-DLBCL显示出与普通DLBCL不同的复杂遗传改变和独特的生物学特征。（2）3例中枢原发性A-DLBCL，患者同时发生MYC / BCL2双表达DLBCL；都显示MYD88 L265P突变和RELA，RELB和/或c-Rel的核阳性，表明NF-κB途径的组成性激活。（3）通过免疫组化在100例GIDLBCL中检测了EZH2的表达，研究表明，EZH2过表达与GIDLBCL患者的不良预后有显著相关性。（4）在GIDLBCL中检测PD-1和PD-L1的表达，较高数量的PD-1+ TILS与较好的预后相关。（5）对27对肿瘤标本和匹配的正常组织标本进行全外显子测序，对数据进行分析，筛选224个基因GI DLBCL和TCGA数据两者有差异（P＜0.05），与肿瘤相关基因27个。（6）对10例窦性大B细胞淋巴瘤进行分析，发现肿瘤细胞通常表达CD30，并具有TP53基因的突变，BCL6、BCL2和/或MYC的拷贝数增加比较常见。