RNA结合蛋白AUF1对HBV mRNA的作用及机制研究

乙肝病毒(HBV)的mRNA不仅指导HBV蛋白翻译，也是HBV基因组逆转录的模板，研究与其作用的肝细胞蛋白及作用机理，将有助于阐明HBV感染机制。腺嘌呤尿嘧啶(AU)富集区结合因子1（AUF1）是一种RNA结合蛋白，在炎症和病毒感染等病理过程中有重要作用。我们前期工作表明：HBV mRNA序列中有两处潜在AUF1结合位点，含AUF1特征性结合基序AUUUA，AU含量约70%，且在HBV各亚型中高度保守；RNA免疫共沉淀结果提示AUF1可与上述两序列结合。本项目拟利用整合了HBV全基因组的HepG2.2.15细胞和乙肝患者肝穿标本，利用RNA免疫共沉淀、凝胶迁移实验等，证实AUF1与HBV mRNA结合；分析AUF1对HBV mRNA的作用及机制；并探讨AUF1不同亚型及其磷酸化状态对HBV mRNA的影响；最终阐明AUF1对HBV在肝细胞中生命周期的影响，为HBV临床防治提供理论支持。

乙肝病毒(HBV)的mRNA 不仅指导HBV 蛋白翻译，也是HBV 基因组逆转录的模板，研究与其作用的肝细胞蛋白及作用机理，将有助于阐明HBV 感染机制。腺嘌呤尿嘧啶(AU)富集区结合因子1（AUF1）是一种RNA 结合蛋白，在炎症和病毒感染等病理过程中有重要作用。在本课题中，我们利用整合了HBV 全基因组的HepG2.2.15 细胞和乙肝患者肝穿标本，利用RNA 免疫共沉淀、凝胶迁移实验等，证实AUF1 与HBV mRNA 结合；AUF1不影响HBV mRNA的总体水平，而是参与HBV mRNA由胞核向胞浆的转运；AUF1敲除后，HepG2.2.15细胞产生病毒蛋白和核酸水平均明显降低，提示AUF1在HBV复制过程中具有重要作用。AUF1蛋白有4个亚型，通过RNA干扰技术，发现上述过程中起重要作用的是p40亚型；而AUF1的磷酸化状态对于其功能也有重要影响，通过磷酸化突变体和非磷酸化突变体，证明只有磷酸化状态的AUF在HBV复制过程中发挥作用。总之，通过本课题的研究，阐明了AUF1对HBV 在肝细胞中生命周期具有重要作用，为HBV 临床防治提供理论支持。