tDCs诱导抗原特异性Treg细胞在胃癌免疫逃逸中的作用及机制研究

调节性T细胞(Treg)介导的免疫耐受在肿瘤免疫逃逸有重要作用，但机制尚不完全清楚。基于近期发现耐受型树突状细胞(tDCs)能诱导抗原特异性Treg，结合我们前期研究发现胃癌组织和外周血Treg、tDCs均显著增高，推测tDCs诱导抗原特异性Treg是胃癌发生免疫逃逸的重要原因。本课题拟在此基础上采用慢病毒构建CEA、OVA抗原特异性小鼠tDCs，由tDCs诱导CEA或OVA抗原特异性Treg，检测Treg对不同抗原活化的T细胞功能的影响及有无免疫耐受效应隔离现象；建立表达CEA、OVA的小鼠胃癌动物模型，观察CEA-Treg、OVA-Treg在动物体内的抗原特异性免疫耐受效应；并以Transwell培养法探讨Treg对效应细胞抑制靶点及可能机制；阐明tDCs诱导抗原特异性Treg在胃癌免疫耐受中的重要作用及其机制，丰富对胃癌免疫逃逸发生机制的认识，为设计针对Treg的胃癌生物治疗奠定基础

调节性T细胞是一种重要的免疫抑制细胞，在胃癌组织中发现调节性T细胞有明显的增加，但其参与胃癌免疫耐受机制还有待研究。本课题研究中，我们通过TNFa诱导培养的BMDC获得耐受型DC，然后使用耐受型DC成功的诱导出调节性T细胞。同时我们构建了OVA和CEA抗原的表达慢病毒载体，通过制备相应的慢病毒转染耐受型DC，我们成功获得了抗原特异性的调节性T细胞。在体外实验中，通过混合培养发现抗原特异性Treg细胞对CD4细胞的活化抑制作用同样具有抗原特异性。为了进一步研究这种抗原特异性Treg细胞在小鼠胃癌中的作用，我们制备了稳定表达OVA或CEA抗原的小鼠胃癌细胞系MFC-OVA和MFC-CEA。在荷瘤小鼠中，转入这种Treg细胞并未对小鼠的生存产生明显的影响。为了进一步分析胃癌细胞如何诱导免疫耐受，我们使用MFC细胞上清处理BMDC，发现MFC上清明显的抑制了LPS刺激导致的BMDC的CD40分子上调表达，而且导致了BMDC中STAT3转录因子的磷酸化程度增加。通过定量PCR分析发现MFC细胞中IL4和TNFa的的转录处于较高的水平，提示MFC细胞可能通过这些细胞因子使DC细胞处于耐受状态，从而维持肿瘤部位的免疫耐受。本研究加深了对胃癌中Treg的作用的理解，同时为打破胃癌中的免疫耐受，开发胃癌免疫治疗方法提供了一定的研究基础。