巨噬细胞来源外泌体circRNA调控miR-638表达参与子宫内膜癌EMT及转移研究

The prognosis of advanced and recurrent endometrial cancer (EC) is extremely poor. It is of great value to explore the mechanism of metastasis and to identify the new therapeutic target. In the previous study we have found that miR-638 was involved in the epithelial mesenchymal transitions (EMT) of EC by targeting MEF2C, and tumor-associated macrophages (TAM) participated in this process and promoted the EMT by down-regulating the miR-638 level. Therefore, we hypothesized that TAM-derived exosomal circ_0000227 promote the EMT by targeting the miR-638/MEF2C signaling axis. In this study we will try to investigate the relationship between the expression of circ_0000227/miR-638/MEF2C pathways in vitro and in vivo, and to confirm the role of TAM-derived exosomal circ_0000227 in the EMT and metastasis, which may help to identify the new therapeutic targets for endometrial cancer treatment.

晚期复发子宫内膜癌的疗效和预后差，探索复发转移的分子机制，寻找治疗新靶点已成当务之急。申请人前期研究发现，miR-638通过靶向调节MEF2C，参与子宫内膜癌EMT及转移；而肿瘤相关巨噬细胞（TAM）来源外泌体在诱导子宫内膜癌细胞侵袭过程中，可诱导miR-638表达下调。因此我们推测：TAM来源外泌体circ_0000227可能通过下调子宫内膜癌细胞miR-638表达，进而诱导靶基因MEF2C表达上调，从而促进子宫内膜癌细胞EMT，促进侵袭转移。因此，本研究旨在通过体外、体内研究和人体标本检测，探讨circ_0000227/miR-638/MEF2C通路各分子表达的关系，明确TAM来源外泌体circ_0000227在诱导子宫内膜癌细胞EMT、侵袭及转移中的作用及可能机制；同时，通过对该通路各环节的干预研究，为后续寻找治疗新靶点提供依据。

子宫内膜癌(EC)是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，晚期及复发EC的疗效和预后差，探索子宫内膜癌复发转移，寻找新的治疗靶点已成为当务之急。本课题通过circRNA芯片筛选出肿瘤相关巨噬细胞来源外泌体circ_0000227，发现circ_0000227存在3个miR-638结合位点，且通过实验证实下调circ_0000227表达后的巨噬细胞上清可诱导内膜癌细胞miR-638表达下调 ，确认miR-638为circ_0000227调控miRNA。筛选及验证MEF2C为miR-638直接调控靶基因，且MEF2C mRNA水平与miR-638表达之间存在显著的负相关。进一步体外和体内实验发现，TAM来源外泌体circ_00 00227通过miR-638/MEF2C通路参与诱导子宫内膜癌EMT。去甲基化试剂处理子宫内膜癌组织后发现EC癌组织中的miR-638的dNA甲基化程度明显高于癌旁组织，并且发现miR-638启动子甲基化水平与FIGO 分期之间存在显著正相关，miR-638表达与FIGO分期之间存在显著负相关。体内及体外实验进一步研究发现，通过构建转染miR-638 mimics的EC细胞系, 发现miR-638的过度表达抑制细胞增殖、迁移、侵袭，并促进细胞凋亡；通过稳定转染miR-638 mimics的EC细胞在裸鼠皮下形成移植瘤，发现miR-638的过度表达显著抑制了肿瘤生长。本课题明确了circ_0000227/miR-638/MEF2C通路的功能学意义与作用机制，并通过对相关环节的干预研究，为后续寻找新的干预靶点提供具体依据。 此外，我们同时发现EC中miR-192-5p基因也存在启动子甲基化，体内外功能学研究表明，miR-192-5p过表达抑制了与EMT相关的癌基因蛋白表达。ALX1 为miR-192-5p的靶基因，并介导了miR-192-5p的肿瘤抑制功能。因此本课题研究结果表明，circ_0000227/miR-638/MEF2C通路、miR-192-5p及其下游基因，可作为潜在的EC预后生物标志物，为后续选择EC的干预靶点提供依据，具有重要的临床和科研价值。