EHV-1囊膜蛋白gD高尔基体驻留功能的分子机制研究

It remains unclear about the mechanism of envelopment of Equine herpesvirus type 1 (EHV-1), which not only hinders the prevention and treatment of relevant diseases but also blocks the development of new vaccines. The envelope protein gD encoded by EHV-1, whose localization is different from that of other herpesvirus (e.g. HSV-1 and PRV), will be detained in Golgi network and participated directly in the envelopment after expression, however, the mechanism has not been reported so far. Our previous studies revealed that the FD and CT domain play a key role in the localization of gD. We will continue focusing on three aspects including identification of gD Golgi-retention signal (GRS), effects of phosphorylation sites in CT domain and host cell target protein(s) on gD Golgi retention function, in order to study the molecular mechanism of the Golgi-retention function. Our studies will provide theoretical basis for elucidating the mechanism of envelopment and develop new chimeric VLP vaccines.

马疱疹病毒1型(EHV-1)的囊膜形成机制还不清楚，阻碍了相关疾病的防治及新型疫苗的研发。EHV-1与其它疱疹病毒(如HSV-1和PRV等)不同，其囊膜蛋白gD表达后会驻留于高尔基体内并直接参与囊膜的形成，然而其机制目前尚未见报道。我们的前期研究结果显示，gD蛋白的FD(Functional domain)及CT(Cytoplasmic terminal)两个功能区在定位功能上起关键作用。因此，本项目将继续从gD高尔基体驻留信号序列的鉴定、gD蛋白胞质区磷酸化位点及宿主细胞靶蛋白三个方面，研究gD高尔基体驻留的分子机制。本研究将为阐明EHV-1囊膜形成机制及新型VLP嵌合疫苗的研发奠定理论基础。

马疱疹病毒1型(EHV-1)的囊膜形成机制还不清楚，阻碍了相关疾病的防治及新型疫苗的研发。我们的前期研究结果显示，EHV-1与其它疱疹病毒(如HSV-1和PRV等)不同，其囊膜蛋白gD表达后会驻留于高尔基体内并直接参与囊膜的形成。通过研究EHV-1 gD囊膜蛋白高尔基体驻留分子机制，促进人们进一步认识疱疹病毒二级囊膜（Secondary envelopment）的形成机制。因此，本课题分别从gD囊膜蛋白高尔基体驻留的关键功能区的鉴定、gD囊膜蛋白磷酸化修饰对其高尔基体驻留的影响及宿主细胞互作蛋白对高尔基体驻留的影响三方面开展了研究。研究结果表明，EHV-1 gD高尔基体驻留是由多功能区共同决定，其中ECD促进融合蛋白在细胞质膜系结构的驻留，CTD具有调控囊泡形成的功能，二者对gD囊膜蛋白高尔基体驻留起到关键作用；蛋白质质谱及Co-IP结果表明，gD囊膜蛋白能与调控细胞膜泡形成及运输的宿主蛋白发生相互作用，进一步证实gD囊膜蛋白具有调控宿主细胞囊泡形成的潜在功能；通过蛋白质修饰质谱技术鉴定出EHV-1 gD囊膜蛋白S391位点发生磷酸化修饰，突变该位点会影响gD囊膜蛋白的亚细胞定位。本研究将为阐明EHV-1囊膜形成机制及新型VLP嵌合疫苗的研发奠定试验基础。