调控miR-429表达对食管鳞癌细胞凋亡和侵袭作用的影响

Esophageal carcinoma is common in China and miRNA is very important in regulating tumor cell proliferation and apoptosis. Some research showed that miR-429 may play a key role in regulating tumor growth as tumor suppressor genes and it can be used as poorly differentiated and invasive tumor biomarker, but the relationship between the esophageal cancer and miR-429 remains unclear. Our previous miRNA chips analysis and qRT - PCR results showed that the expresssion of miR-429 in esophageal carcinoma had been decreased and Bcl-2 was miR-429 target gene. This study intends to analyse the correlation between miR-429 expression and esophageal carcinoma pathological characteristics,explore the effects of miR-429 on the biological behavior of the esophageal carcinoma cell line KYSE30 and EC-1, identify the target genes of miR-429. The study will reveal the molecular mechanism of apoptosis and invasion, which provides potential targets and important basis for esophageal carcinoma gene treatments .

食管癌是我国常见的消化道肿瘤，miRNA参与调控细胞增殖和凋亡，在肿瘤的发生发展过程中扮演了重要的角色。研究表明miR-429可能以抑癌基因的角色参与肿瘤的发生发展并可作为低分化肿瘤和侵袭性肿瘤的生物标志，但是miR-429与食管癌之间的关系迄今未见报道。我们前期通过miRNA芯片和qRT-PCR研究显示miR-429 在食管癌组织中表达下调；并证实Bcl-2基因为miR-429的靶基因。本研究拟扩大标本探索食管鳞状细胞癌组织中miR-429表达水平与病理特征的相关性；明晰体内外调控miR-429表达对食管鳞癌细胞系KYSE30和EC-1生物学行为的影响；揭示其影响细胞凋亡和侵袭的分子机制。为食管癌的基因生物治疗提供潜在的靶点及实验依据。

食管癌是我国常见的消化道肿瘤，miRNA参与调控细胞增殖和凋亡，在肿瘤的发生发展过程中扮演了重要的角色。研究表明miR-429可能以抑癌基因的角色参与肿瘤的发生发展并可作为低分化肿瘤和侵袭性肿瘤的生物标志。本课题研究内容：1.收集食管鳞癌组织和配对的癌旁食管黏膜组织标本，应用Agilent miRNA基因芯片检测了3例食管癌标本（包括癌组织和癌旁组织）中microRNA的表达情况；2.检测食管鳞状细胞癌组织中miR-429表达水平并分析与病理特征相关性；3.观察体内外调控miR-429表达对食管鳞癌细胞系KYSE30和EC-9706生物学行为的影响；4.鉴定 miR-429的靶基因及分析细胞凋亡、周期改变和侵袭转移产生分子机制；5. 根据microRNA基因芯片检测结果筛选出食管鳞状细胞癌组织中另外两个重要的microRNA（miR-451和miR-655），检测了其表达及对食管鳞癌细胞凋亡和侵袭作用的影响。实验结果如下：1.基因芯片分析筛选出201个差异表达的miRNA，包括102个食管癌组织中上调的miRNAs和99个下调的miRNAs；2. qRT-PCR结果表明食管磷癌组织中miR-429表达下调。miR-429的表达水平与肿瘤分化、TNM分期和淋巴结转移情况密切相关.3.体内外实验结果显示上调miR-429表达抑制了EC9706 和KYSE30 细胞的生长；抑制了细胞的侵袭；诱导了EC9706 and KYSE30 细胞的凋亡；4. 运用生物信息学分析预测BCL-2 和SP1是miR-429靶基因，采用双荧光素酶报告基因法结果显示：miR-429通过和BCL-2、SP1的3’UTR结合负性调节其表达。鉴定出BCL-2 和 SP1是miR-429靶基因。进一步实验结果显示miR-429通过靶向SP1和Bcl-2抑制食管磷癌细胞的生长和侵袭并促进其凋亡；5. miR-451在食管鳞癌组织中低表达，miR-451通过作用于靶基因CDKN2D和 MAP3K1参与调控食管鳞癌细胞生长。miR-655在食管鳞癌组织中低表达，miR-655通过作用于靶基因PTTG1抑制了食管鳞癌细胞的侵袭。结论：食管磷癌组织中miR-429表达下调， miR-429通过靶向SP1和Bcl-2抑制食管磷癌细胞的生长、侵袭并促进其凋亡。该研究为食管癌的基因生物治疗提供潜在的靶点及实验依据。