单纯疱疹病毒载体的构建

为了在分子水平上进行对神经系统基因调控。神经生理，病理以及神经系统疾病基因治疗的研究，我为构建了能够将外源基因导入体外培养的神经细胞和动物中枢神经系统的单纯疱疹病毒I型（Herps Simplex Virus Type I,HSV-1）载体，进行外源基因的表达及动物实验。将引物DNA末端dig-标记后，作为探针筛选出HSV-1基因组中含包装序列，复制子以及IE68启动子，构建成质粒型载体pHSV-lac，并进一步构建成含HSVIE、HCMV双启动子操纵两个报告基因（Lac .z.luc）的质粒型载体pHlcl。病毒型载体研究中构建pHSV-TK载体，插入HSVIE-lacZ/HCMV-luc转录单位，与HSV-1tsK株共转染细胞，通过同源重组筛选重组病毒。pHSV-lac.pHlcl在体外培养神经细胞和动物脑内均获得表达。