吸烟对口腔黏膜上皮细胞NOD1信号通路和防御能力的影响

口腔黏膜上皮细胞的防御能力异常与多种口腔黏膜病密切相关。NOD1信号转导通路是固有免疫学的重大研究成果，在口腔黏膜上皮细胞防御作用方面有着极其重要的作用。已有研究表明，吸烟可激活上皮细胞内caspase-12，而caspase-12对NOD1信号通路有抑制作用，导致局部防御能力下降。本研究拟构建体外吸烟细胞培养模型，借助RNA干扰等分子生物学方法，探究吸烟对口腔黏膜上皮细胞NOD1通路的影响以及β-防御素等抗菌肽产生能力的变化，验证吸烟对NOD1通路影响机制中caspase12所起的作用。通过检测正常不吸烟者、正常吸烟者和口腔白斑（吸烟与非吸烟者）黏膜上皮组织中NOD1、Rip2、NF-κB、β-防御素等抗菌肽的表达，结合临床分析吸烟对口腔黏膜局部免疫和防御能力的影响。本研究对于提高口腔白斑等黏膜病的防治效果、阻断病损发展、改善预后具有重要意义。

口腔黏膜上皮细胞的防御能力异常与多种口腔黏膜病密切相关。NOD1信号转导通路是固有免疫学的重大研究成果，在口腔黏膜上皮细胞防御作用方面有着极其重要的作用。已有研究表明，吸烟可激活上皮细胞内Caspase-12，而Caspase-12对NOD1信号通路有抑制作用，导致局部防御能力下降。本研究通过构建体外吸烟细胞培养模型，结合香烟烟雾溶出物处理口腔黏膜上皮细胞，采用Western blot，免疫荧光，qPCR和ELISA等研究方法，发现吸烟对口腔黏膜上皮细胞NOD1信号通路具有抑制作用，可降低口腔黏膜上皮细胞人β防御素hBD1,3的产生能力。借助RNA干扰等分子生物学方法，证实了吸烟对NOD1通路影响机制中Caspase-12所起的负向调控作用，研究发现Caspase-12表达沉默可减弱或部分逆转吸烟对口腔黏膜上皮细胞NOD1通路的抑制作用，进一步研究发现Caspase-12表达沉默后吸烟可明显增强口腔黏膜上皮细胞hBDs的产生。通过免疫组化和免疫印迹法检测非吸烟与吸烟组的正常口腔黏膜、口腔白斑和鳞癌组织中NOD1信号通路内关键蛋白和hBDs表达水平，发现吸烟可增强Caspase-12的表达，而降低NOD1和hBD1的表达，表明吸烟可能通过抑制NOD1通路而降低口腔黏膜局部免疫。通过白斑组织白色念珠菌的检测，发现吸烟可明显增加白念感染率，并且发现白念白斑组Caspase-12表达明显增强，hBDs表达明显降低，表明吸烟和白念感染因素在口腔白斑发生发展过程中可能联合起作用，明显降低了口腔黏膜的局部免疫，促进了疾病的发展。本研究为提高口腔白斑等黏膜病的防治效果、阻断病损发展、改善预后提供了一定的实验基础和理论支持。