双黄升白颗粒双重调控造血干细胞及肿瘤干细胞增殖分化的研究

目前治疗肿瘤化疗导致的骨髓抑制主要是注射集落刺激因子(CSF)，但外源的CSF有促进肿瘤生长的可能，而双黄升白颗粒可以在促进骨髓造血细胞增殖的同时抑制肿瘤细胞增殖。.微小RNA(miRNA)在造血干细胞和肿瘤干细胞的增殖中起着重要的调控作用。我们拟在前期研究基础上，采用肺癌A549荷瘤鼠制成肿瘤化疗骨髓抑制模型，用双黄升白颗粒进行治疗，对外周血、骨髓、肿瘤进行常规检测，用荧光免疫法检测造血干细胞及肿瘤干细胞标志；用免疫磁珠法分离干细胞，用miRNA芯片筛选作用靶点，用荧光定量PCR对筛选出的靶点进行验证，分析双黄升白颗粒对造血干细胞及肿瘤干细胞增殖的影响，对干细胞miRNA表达的影响及信号途径。以期为该药临床应用提供进一步理论依据，为治疗肿瘤化疗骨髓抑制提供安全有效的药物；为科学研究提供肺癌A549荷瘤鼠相应miRNA图谱，并从新的角度探讨辨证论治及补肾生髓法治疗肿瘤化疗骨髓抑制的本质。

目的：观察双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制细胞周期的调控作用；观察双黄升白颗粒对骨髓造血干细胞及肺癌干细胞的调控作用；初步建立双黄升白颗粒治疗肿瘤化疗骨髓抑制的microRNAs图谱。.方法：荷瘤裸鼠随机分为治疗组（中药+化疗）、模型组（单用化疗）、空白组（模拟用药），各组小鼠于第4、6、8、10天取部分处死。检测血常规、骨髓及肿瘤细胞周期、计算增殖指数（PI）、骨髓造血干细胞及肺癌干细胞流式阳性率等常规指标，microRNAs芯片分析双黄升白颗粒调控骨髓造血干细胞及肺癌干细胞的作用靶点。.结果：双黄升白颗粒组白细胞计数、肿瘤细胞中处于G0/G1期的百分比、骨髓细胞PI较CTX组高，而骨髓细胞中处于G0/G1期的百分比、肿瘤细胞PI较模型组低（P<0.05）；双黄升白颗粒组CD34+SCA-1+骨髓造血干细胞流式阳性率高于模型组，差异有统计学意义（P<0.05），但是其SP+ 、CD24+IGF-1R+ 、CD133+肺癌干细胞流式阳性率低于模型组，差异具有统计学意义（P<0.05）；双黄升白颗粒组与CTX组骨髓及肿瘤干细胞中表达有差异的microRNAs共计有300余种。.结论：.1、双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制期的A549肺癌荷瘤裸鼠的骨髓及肿瘤细胞周期具有调控作用；.2、双黄升白颗粒对骨髓造血干细胞及肺癌干细胞的增殖分化具有调控作用；.3、双黄升白颗粒对干细胞的调控作用可能是通过调控相应microRNAs的表达实现的。