喉癌实体瘤干细胞的分离鉴定及特异基因表达谱研究

现已有肿瘤干细胞存在的确凿证据,课题组已用喉癌Hep-2细胞系进行了肿瘤干细胞的研究，发现CD133+细胞为喉癌肿瘤干细胞的标志之一。本课题在前期工作的基础上，分离并鉴定人体喉癌干细胞。根据CD133表型将体外培养的喉癌实体瘤细胞分成不同亚群，测试不同亚群的体外增殖和分化能力，筛选干细胞亚群，再将该亚群瘤细胞种植到SCID小鼠腹部皮下，观察它们在小鼠体内的成瘤能力并进行传代，鉴定出可重建来源肿瘤组织各表型的亚群，该亚群即为喉癌的肿瘤干细胞。进一步研究与干细胞发生扩展相关的分子机制，用微点阵分析研究干细胞基因特异性表达谱，应用表达谱芯片比较CD133+，CD133-瘤细胞及癌旁组织的基因表达差异，寻找实体瘤干细胞基因的特异表达，对于差异表达的基因用RealtimePCR方法进行验证和定量分析，进一步研究其信号传导通路。这对认识喉癌发生发展的机制和研制新的针对肿瘤干细胞的治疗方法具有重大意义。