细胞直接接触促进间充质干细胞向内皮细胞分化的机制研究

多项研究证实间充质干细胞在不同诱导条件下被成功诱导分化为内皮细胞，但目前对其分化机制认识仍十分有限。我们已通过成功建立间充质干细胞与内皮细胞间接和直接共培养模型，发现了细胞与细胞间的直接接触在干细胞向内皮细胞分化过程中起至关重要的作用（Microvascular Res, 2008, 75: 59-67）；并已采用双相电泳技术对不同培养方式、不同分化阶段的干细胞蛋白质表达对比分析，发现了41个显著差异性高表达的蛋白点；本研究拟使用串联质谱和蛋白质组信息学对这些差异表达蛋白进行分析，从中筛选出与分化密切相关的若干关键蛋白，并使用RNA干扰技术特异地阻断相应基因表达，对干细胞分化程度的变化进行重新评估，从而确证所分析蛋白的作用。本项目为阐明细胞直接接触影响干细胞向内皮分化机制，更好地发挥间充质干细胞在细胞替代治疗中的作用奠定了基础。

课题在前期工作中成功的建立了MSC与EC共培养系统，并通过共培养促使MSC向内皮细胞分化，因根据现有实验条件技术反复论证认为，利用双向电泳技术寻找差异蛋白随从理论上可行，但是实际筛选出的差异蛋白可能会由于细胞处于不同周期等不稳定因素而影响到最终筛选的靶目标蛋白，于是课题后期在利用双向电泳技术寻找差异蛋白这一步，对课题进行了调整，通过大量文献查阅发现并验证SDF-1不仅在MSC募集和迁移方面起到作用，并且还可以刺激MSC分泌VEGF，通过进一步的实验探究和验证SDF-1可以联合VEGF更高效的促进MSC向EC分化；单独使用SDF-1可以促进MSC向EC分化；单纯使用VEGF诱导MSC分化的最佳剂量是25ng/ml。