生技霉素基因工程菌基因稳定性及代谢调控的研究

以温敏型整合质粒pKC1139为载体和tsr抗性作为同源重组整合后选择性标记，并利用与宿主菌中与螺旋霉素生物合成基因无关的两个片段，构建了适用于同源重组的异戊酰基转移酶基因ist整合的重组质粒，通过DNA转化转入螺旋霉素产生菌，再经过在高温下培养筛选纯化获得ist基因整合型菌种，Sourthen杂交证明了ist基因在染色体中的整合状态。基因整合型菌种产生以异戊酰螺霉素为主成份的4酰化螺旋霉素，在不加压情况下连续传代及放大实验中均十分稳定，发酵效价及产物组份均有显著改善。生理代谢研究表明整合型菌种的缬氨酸脱氢酶VDH亮氨酸脱氢酶LDH活性均较高，提示整合型菌种发酵水平及组分的改善可能是通过氨基酸代谢的调控。