双功能酶APE1参与卵巢癌铂类耐药的机制研究

化疗耐药是卵巢癌复发转移的主要原因，寻求有效耐药逆转策略是提高卵巢癌疗效的关键。前期研究发现，①双功能酶APE1与卵巢癌发生发展及预后有关；②在铂类耐药的卵巢癌组织和细胞中均出现APE1高表达；③APE1siRNA显著提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，而APE1重组质粒显著降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，提示APE1参与卵巢癌铂类耐药形成。但APE1参与卵巢癌铂类耐药的机制未见报道。本课题拟在前期工作基础上，着眼于双功能酶APE1的细胞定位与其DNA修复和氧化还原两大功能的联系，构建不同APE1功能的重组质粒，通过RT-PCR、western blot、激光共聚焦及凋亡检测等技术，观察APE1不同功能对卵巢癌细胞铂类敏感性的影响，探讨APE1参与肿瘤细胞铂类耐药的机制，并以亚硝基化为切入点，探索APE1亚硝基化状态对其细胞定位和两大功能的调控。从而为以APE1为靶点逆转肿瘤细胞耐药提供依据。

化疗耐药是卵巢癌复发转移的主要原因，寻求有效耐药逆转策略是提高卵巢癌疗效的关键。本课题在前期工作基础上，从体内、体外实验两方面进一步探讨双功能酶APE1/Ref-1的DNA修复和氧化还原两大功能对卵巢癌细胞生物学行为及铂类耐药的影响，并初步探讨APE1/Ref-1的作用机制。我们首先用免疫组化检测了120例卵巢癌组织中APE1/Ref-1的表达情况，统计分析表明APE1/Ref-1胞浆表达与卵巢癌组织病理类型、FIGO分期、细胞分化程度、铂类耐药及不良预后有关。体内实验和体外实验均证实，APE1/Ref-1过表达可显著促进卵巢癌细胞增殖和侵袭能力，并降低卵巢癌细胞顺铂敏感性，其中APE1/Ref-1的氧化还原功能发挥主要作用。进一步研究我们发现APE1/Ref-1过表达可通过上调增殖相关因子（Akt、cyclinD1）和侵袭相关因子（MMP2、E-cadherin）表达水平促进卵巢癌细胞增殖能力和侵袭能力，并使卵巢癌细胞S期比例显著增加。APE1过表达可降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，其机制可能为：（1）APE1过表达可一定程度抑制 Caspase-3 的活化及降低 Bax 蛋白的表达，增加 Bcl-2 蛋白的表达；（2）APE1过表达可一定程度抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡过程中细胞色素C从线粒体向胞质释放。利用基因芯片技术，我们发现APE1/Ref-1调控的信号通路主要涉及MAPK信号通路、细胞粘附、细胞吞噬、阿米巴运动等方面并与TP53、HIF1α、PCNA等基因存在调控关系。