一种氧化应激生物标志物定量分析系统的建立及应用

环境污染物对生物体的氧化应激损伤往往是机体主要的致命因素。因此，通过检测机体抗氧化防御系统能力，评价环境污染物的毒性损伤作用，是一种有效的生态毒性评价方法。现今的体内抗氧化防御系统生物标志物（如SOD等）的检测存在着指标单一、标准不统一和缺乏综合性等不足之处，难以综合评定污染物的氧化损伤毒性。因此，本项研究试图建立一套全面、准确、高效的机体内氧化应激定量分析体系。目前普遍被接受的ORAC检测方法具有接近机体生理反应、认可度和灵敏度高、准确性和重现性佳等优势。本项研究以ORAC抗氧化检测方法为基础，通过寻找适用于本体系的其他不同自由基建立多个统一而互相联系的检测方法，并应用于生物体内的氧化应激反应检测。以确定生物体内氧化应激的生理正常值范围，确定污染物的污染程度和毒性效应，进一步进行相应的毒性评级和分类。提高实验数据互认程度，推动抗氧化防御系统生物标志物在环境污染监测中的应用。

环境污染物对生物体的氧化应激损伤往往是机体主要的致命因素。因此，机体抗氧化防御系统能力是评价环境污染物毒性作用的有效指标。现有的体内抗氧化防御系统生物标志物（如SOD 等）的检测存在着指标单一、标准不统一和缺乏综合性等不足之处，难以综合评定污染物的氧化损伤毒性。本项研究以ORAC抗氧化检测方法为基础，建立一种机体清除自由基能力的检测方法，并应用于生物氧化应激效应的检测。本项研究选用国际标准试验用鱼-斑马鱼作为试验生物，主要对过氧自由基（ROO• ）进行检查，以偶氮化合物AAPH作为氧自由基来源，荧光素钠（FL）为荧光指示剂，并以维生素E类似物（Trolox）为定量标准观察自由基与荧光素钠作用后其荧光强度衰退过程，检测各种抗氧化剂加入这个体系中延缓荧光素钠荧光强度衰退的能力，以此评价抗氧化剂的抗氧化能力。本研究所建立的定量分析方法具有强特异性；精密度在97%-108%之间，相对标准偏差（%RSD）小于15%；准确度高，回收率在97%-108%之间；重现性佳（变异系数是3.09%）；此法的定量检出限和最低检测限分别为3.03和1.00 μmol Trolox/mg protein，可接受的相关系数(R2)≥0.99。依据所建立的定量分析方法积累的ORAC生理正常值范围为0-50μmol Trolox/mg protein，并对污染物的污染程度和毒性效应进行了评级和分类，提高实验数据互认程度，推动抗氧化防御系统生物标志物在环境污染监测中的应用。综述《ORAC分析法的发展和应用》已投稿至《中国食品卫生杂志》，并已被采用，本项研究相关论文正在准备投稿中。