重组慢病毒介导PEDF基因诱导肾癌干细胞凋亡的分子成像研究

肾癌干细胞是存在于肾癌肿瘤细胞群体中具有无限增殖能力和自我更新特性的癌细胞亚群。肾癌干细胞数量少，但自我复制能力极强，所以在肾癌转移、复发、耐药等方面起决定性作用，因此成为肾癌治疗的新靶点。光学分子成像是一种灵敏、特异的成像方法，可以实时、动态、无创地监测目的基因在生命体内分子水平的代谢过程。色素上皮衍生因子（PEDF）为已知的人体最强的血管生长抑制因子，具有抗血管新生和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。.本研究利用精诺真可见光成像系统，在体外和活体内实时、动态、无创地观察慢病毒介导的PEDF基因抑制肾癌干细胞的增殖、诱导其凋亡的变化过程，并活体观测PEDF基因治疗肾癌干细胞移植瘤的效果，通过检测多种血管活性因子、凋亡和侵袭等因子，探索其抑制血管新生和是否通过IκB/NF-κB/Teloerase路径诱导肾癌干细胞凋亡，为肾癌治疗寻找新的靶点。

色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF）是目前已知的人体最强的血管生长抑制因子，是最有希望成为治疗肿瘤和血管增生性疾病的候选基因。肾细胞癌是泌尿外科常见的恶性肿瘤，在我国肾癌的死亡率很高，主要原因是肾细胞癌对放射治疗和化学治疗均不敏感。因此，基因治疗显得尤为重要。PEDF作为最强的内源性抗新生血管生成因子，已证实其对多种肿瘤的生长和血管生成具有抑制作用。本课题通过构建过表达PEDF基因的慢病毒（Lentivrius-PEDF），在活体状态下探讨PEDF对肾癌生长和血管新生的抑制作用。结果显示，PEDF对肾癌细胞的增殖和凋亡效果不明显，而对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖和凋亡具有明显作用，在缺氧状态下肾癌细胞中血管内皮生长因子（VEGF）的表达明显降低。通过皮下注射Lenti-PEDF治疗裸鼠肾癌皮下移植瘤模型发现，相比空病毒组（Lenti-Control）、PBS组，Lenti-PEDF组对肾癌的生长具有明显的抑制作用，取肿瘤组织做免疫组化发现Lenti-PEDF组中VEGF的表达下降，免疫荧光显示肿瘤内微血管密度（MVD）明显降低。因此，我们推断PEDF可能通过抑制VEGF的表达从而抑制新生血管形成和肾癌的生长，希望为肾癌的治疗寻求一个新的方法，也为临床应用PEDF基因治疗肾癌提供实验依据。