p53、MDM2基因及其多态在稽留流产中的作用机制研究

稽留流产可能与过度的细胞凋亡和较少的血管生成有关。p53在细胞周期调控、诱导细胞分化和凋亡等过程中起着重要的作用，MDM2是p53调控网络中的重要调节因子。基因内SNP多态位点的改变可以引起基因表达的改变。.我们前期研究发现MDM2 SNP309 G/G基因型可能与稽留流产的发生有关，MDM2 SNP309 G/G和p53 codon72 Pro/Pro基因型能够诱导MDM2基因的高表达，从而可能导致稽留流产。.但其具体机制尚不清楚。本课题拟检测人工及稽留流产绒毛中p53、MDM2基因多态分型与p53、MDM2、HIF-1α、VEGF等表达差异的关系；VEGF及p53-MDM2信号通路对血管生成的剂量反应关系；培养原代及绒毛滋养细胞株，并转染重组多态质粒，ChIP-PCR研究p53、MDM2多态性对SP1转录激活子的作用，明确p53、MDM2基因及其多态在稽留流产中的作用机制。

稽留流产可能与过度的细胞凋亡和较少的血管生成有关，但其具体机制尚不清楚。p53在细胞周期调控、诱导细胞分化和凋亡等过程中起着重要的作用，MDM2是p53调控网络中的重要调节因子。基因内SNP多态位点的改变可以引起基因表达的改变。在本课题中，我们首先利用PCR-SSP法和PCR-RFLP法分别扩增p53 codon72 和MDM2 SNP309基因的多态基因型，发现MDM2 SNP309 G/G基因型是稽留流产的高危基因型。利用qReal-time PCR法和免疫组织化学方法分别检测早孕绒毛组织中p53和MDM2基因的mRNA和蛋白表达水平，发现p53 codon72 Pro/Pro基因型和MDM2 SNP309 G/G基因型能够诱导MDM2基因的高表达，最终可能导致稽留流产的发生。免疫组化结果显示稽留流产患者绒毛组织的血管生成明显减少，p53、MDM2参与早孕绒毛的血管生成，不同的是p53、MDM2对正常早孕绒毛血管生成起促进作用，而当细胞DNA遭到损伤或缺氧加剧，则会诱导p53、MDM2的高表达，抑制早孕绒毛的血管生成。将重组MDM2基因的pcDNA3质粒转染入绒毛滋养细胞JEG-3、Bewo中，通过模拟早孕绒毛生长的低氧环境，并加入p53-MDM2相互作用的拮抗剂Nutlin3，发现p53、MDM2基因通过调节HIF-1α和VEGF基因的表达调控绒毛滋养细胞的生长，最终影响妊娠结局。以上结果提示p53-MDM2可能参与了稽留流产的发生和发展，为稽留流产的预防和治疗提供了一定的研究基础。