通过P53/AMPK通路研究中药对多囊卵巢综合征颗粒细胞自噬的调控作用

The incidence of polycystic ovary syndrome (PCOS), as one of the common stubborn diseases in gynecology, has gradually increased in recently years. Although PCOS triggers reproductive endocrine disorders and long-term complications seriously threatened women health , the pathophysiology of PCOS is pooly understood. Our previous reseach has confirmed that the autophagy of PCOS rats' granulosa cell increased significantly. We also found that treating them with traditional Chinese medicine, which strengthens the spleen and kidney and nourishes the blood and eliminate dampness, could reduce autophagy through affecting the protein expression of Bclin-1 and LC3. To explore a correlation between reduced PCOS ovary granulosa cell and autophagy, we will culture granulosa cells and measure genes and proteins of access- related P53/AMPK by Realtime-PCR and Western-blot in this research. Chinese medicine, used to strengthen the spleen and kidney and nourish the blood , will be a model intervention factor to explore the molecular mechanism of TCM.

近年来多囊卵巢综合征（PCOS）发病率逐年增高，其引发的生殖内分泌紊乱及远期并发症给患者带来极大危害。目前尚未发现其确切的发病机理，成为妇科、生殖内分泌常见的疑难病之一。本课题组通过前期工作已经证实PCOS大鼠颗粒细胞自噬的发生率明显升高，补肾健脾、养血通利中药可以调控Bclin-1及LC3的蛋白表达水平，从而降低自噬的发生。在此基础上，我们将通过构建PCOS的颗粒细胞培养模型，通过Realtime-PCR及Western-blot等方法检测细胞自噬相关通路P53/AMPK中相关基因与蛋白，探索PCOS卵巢颗粒细胞的减少与其自噬的相关性，从而发现PCOS发生的新的相关机制。并应用补肾健脾、养血通利法中药对该模型进行干预，以进一步了解中药治疗多囊卵巢综合征的作用机制。

多囊卵巢综合（PCOS）征是临床常见妇科内分泌疾病，PCOS可导致多种生殖内分泌紊乱和长期并发症，严重威胁女性健康。目前尚未发现其确切的发病机理。本课题组通过前期工作已经证实归术益坤方治疗 PCOS临床疗效确切，但是其作用机制尚不完全明确。自噬参与多种生理、病理过程中，自噬性细胞死亡是不同于凋亡的细胞程序性死亡。LC3和Beclin1是自噬相关蛋白，在自噬体形成中起重要作用，P53/AMPK信号通路是调控自噬的重要通路。本课题组通过前期工作已经证实 PCOS 大鼠颗粒细胞自噬的发生率明显升高，补肾健脾、养血通利中药可以调控 Bclin-1 及 LC3 的蛋白表达水平，从而降低自噬的发生。.本实验主要研究补肾健脾、养血通利中药—归术益坤方治疗PCOS的分子机制。本实验通过体外培养大鼠卵巢颗粒细胞，以丙酸睾丸酮（TP）和归术益坤方含药血清进行干预，通过Real time-PCR 和western blot法，研究中药对Beclin1, LC3, mTOR, P53, AMPK, sestrin2 and TSC1/2的影响。结果表明：TP 可以上调Beclin1 和 LC3的表达, 归术益坤方可以下调Beclin1 的表达(p=0.000<0.05)，上调 mTOR, p-mTOR 和 AMPKα 的表达, 下调p53、sestrin 的表达 (p=0.000<0.05). 从而得出结论， PCOS 卵巢颗粒细胞的减少可能与颗粒细胞的自噬有关。归术益坤方可以通过调控 p53/AMPK 信号通路来抑制自噬, 这可能是归术益坤方治疗PCOS的新机制。