基于代谢组学燥邪伏留型口腔扁平苔藓的动态研究

Due to the change of life style, the incidence of disease of oral mucosa is increasing and named precancerous condition by WHO .In this study，been done a large number of pre-clinical practice and experimental studies， based on the application of metabolomics technology by ultra-high liquid-mass spectrometry metabolomics analyzer as the core means， The metabolism of pattern recognition and combination of modern analytical techniques to measure blood and urine of patients with OLP-specific endogenous metabolites，and after the intervention of Qingxianyin in the body..At the same time， the use of flow cytometry,，ELISA， immunohistochemistry and other modern technology to research OLP patients using Qingxianyin before and after treatment of local lesions and peripheral blood CD4 +，CD8 + lymphocytes，Th1 cytokines (IFN-γ， TNF-α)， Th2 cytokines (IL-4，10) the dynamic changes..From metabolomics， cellular immunology， inflammation mechanism perspective of local OLP lesions， peripheral blood and changes in endogenous metabolites in the process,，in-depth study of traditional Chinese medicine to Qingxianyin multi-component multi-target treatment of this disease mechanism， is widely used in traditional Chinese medicine treatment of OLP provide a theoretical basis for the promotion of Chinese medicine Qingxianyin in the oral mucosal disease in the application， effectively solve clinical practice problems.

由于生活模式的改变，口腔黏膜病的发病率逐渐升高。口腔扁平苔藓（OLP）是较为常见的病症之一，已被WHO定义为“癌前状态”。本研究在大量前期临床实践和实验研究工作基础上，应用代谢组学技术，以超高液相-质谱联用代谢组分析仪为核心手段，将机体代谢模式识别与现代分析技术有机结合，测定燥邪伏留型OLP病人外周血及尿液中特异性内源性代谢产物以及中药复方清藓饮干预后机体整体内源性代谢物组的变化。同时研究燥邪伏留型OLP病人使用清藓饮治疗前病损局部及外周血中CD4+、CD8+淋巴细胞，Th1细胞因子（IFN-γ、TNF-α），Th2细胞因子（IL-4，10）的动态变化情况。从代谢组学、细胞免疫学、炎症反应机制角度研究OLP病损局部、外周血及内源性代谢产物的变化过程，深入探讨中药清藓饮对本病的治疗作用机制，为中药治疗OLP的广泛应用提供理论依据，以便推广中医药在口腔黏膜病方面的应用，切实解决临床实际问题。

口腔扁平苔藓是一种口腔黏膜慢性非感染性炎症性疾病，其病因要与 T 淋巴细胞介导的免疫学异常相关，一线药物仍为糖皮质激素。由于糖皮质激素的应用过程中存在的风险使其应用受到限制。基于中医药治疗 OLP 的潜力和优越性，代谢组学的整体性、动态性、非靶向等特点适于研究中药复方治疗疾病的动态过程。本研究使用代谢组学研究中药复方治疗燥邪伏留型口腔扁平苔藓的动态变化。.项目采用代谢组学技术，测定空白对照组和OLP病人在清藓饮治疗前后机体整体内源性代谢物组的变化情况。阐明OLP的发病原因和清藓饮治疗OLP多靶点的作用机制。使用流式细胞术检测两组研究对象外周血 CD4+、CD8+淋巴细胞表达情况；ELISA法检测两组研究对象外周血Th1细胞因子（IFN-γ、TNF–α）和Th2 细胞因子（IL-4、10）的分泌表达情况，分析OLP病人TH1/TH2漂移的变化情况。.OLP患者经口服清藓饮后外周血中CD4+、CD8+细胞计数、CD4+/CD8+比值及Th1/Th2比值均向空白对照组结果改变。OLP患者出现的内源性氨基酸、脂类、花生酸类、鞘脂代谢异常。清藓饮对OLP的氨基酸、糖类、脂类、激素等方面表现的代谢异常亦有较好的治疗作用。.基于UPLS-QTOF-MS分析系统发现；与空白对照组比较OLP患者尿液中共鉴定12个结构变量下降，血清中10个变量结构中有9个呈上调，1个下降。OLP患者口服8周清藓饮后，根据生物标志物在尿液中的相对含量，确定正离子检测模式下清藓饮对尿液中表达下调的12个离子中7个具有回调作用，剩余的5个离子继续下调。正离子检测模式下清藓饮治疗后血清中9个上调的离子下调，对于呈下降趋势的Pregnanediol上调。.由于缺乏理想的OLP动物模型，主要使用OLP患者活检组织切片进行临床研究，由于活检的创伤性、尤其是需要多次活检，使我们不能对OLP的发病机制、病程转归以及疾病活动性预测等进行系统的研究。.这种通过检测代谢物水平的整体和动态变化，分析生物体在给药前后的代谢指纹图谱的差异，揭示生物体在特定时间、环境下的整体功能状态的方法，可以无损伤地观察人体生理病理状态，动态评价药物的干预作用，解决了OLP在发病机制、病程转归以及疾病活动性预测方面的难题。