多角度、多目标靶向防治HPV16阳性子宫颈癌及相关机制探讨

Human papillomavirus (HPV) related cervical diseases is severely impaired women's health, however HPV escapes immune attack to persistent infection is the necessary requirements of cervical cancer (CC), and exploring a "good recipe" to prevention and treatment CC from multi-angle at the same time is always the focus of related research. Our pre-research proved that the HPV16/18E5 had important biologic function during the development of CC. Thus, in this research, we creatively simultaneously targeted multi-objective HPV16E5E6E7 the three key pathogenic factors (treatment targets of CC), analyzed the antigenic epitopes of human leukocyte antigen (HLA) with bio-informatics；combined with our former research of L1 (prevention targets of CC), used the insect-baculovirus expression system； especially united the adeno-associated virus (AAV) vectors, constructed L1-E5E6E7 (short-effect preparation)+AAV-L1-E5E6E7(long-effect preparation) to rescue CC; we relied on the three-dimensional cell model and bone/liver/thymus (BLT) humanization animal model, researched the carcinogenesis of L1、E5、E6、E7 in vitro and in vivo, and tested their possibility of prevention and treatment of CC；meanwhile, explored the optimal compatibility and immune method by priming immunity with short-effect preparation and booming with long-effect preparation.

人乳头瘤病毒（HPV）相关的宫颈疾病严重危害着妇女的健康，而HPV逃逸免疫攻击得以持续感染是宫颈癌（CC）发生的必要条件，探索能多角度同时预防与治疗CC的"良方"一直是相关研究的焦点。我们前期研究证实HPV16/18 E5在CC发生发展中有重要生物学作用。由此，本课题开创性的多目标同时靶向HPV16E5E6E7三个关键致病因素（治疗CC靶点），利用生物信息学筛选针对人类主要HLA型别的抗原表位；结合我们前期关于L1（预防CC靶点）的研究，引入昆虫细胞-杆状病毒表达系统； 特别的，联合腺相关病毒（AAV）做载体，制备L1-E5E6E7(短效)+AAV-L1-E5E6E7(长效) 免疫制剂共同阻遏CC；依托筏式三维细胞模型和BLT人源动物模型，体内外同时探索L1、E5、E6、E7 致癌机制及其作为靶点防治CC的可行性；并通过短效制剂启动免疫+长效制剂增强免疫等方法探讨疫苗最佳配伍和免疫方式。

本课题中我们多目标同时靶向HPV16E5E6E7三个关键致病因素（治疗宫颈癌的靶点），利用生物信息学筛选针对人类主要HLA型别的抗原表位；结合我们前期关于L1（预防宫颈癌的靶点）的研究，引入昆虫细胞-杆状病毒表达系统；为了克服普通多肽在体内无法持续表达的问题，我们选用腺相关病毒（AAV）为载体装载目标片段,以期得到靶片段的稳定表达，持续其生物学效应，建立“重组腺相关病毒载体+长肽基因”作为“长效长肽”，让它们“强强联合”制备L1-E5E6E7(短效)+AAV-L1-E5E6E7(长效) 免疫制剂共同阻遏宫颈癌；依托筏式三维细胞模型和BLT人源动物模型，体内外同时探索HPV16 L1、E5、E6、E7 致癌机制及其作为靶点防治宫颈癌的可行性及安全性。在体内外模型中联合疫苗都体现了它强大的防瘤治瘤效应，为我们更好的更早的临床转化奠定了坚实的基础。而在探讨疫苗的免疫效应机制时，我们发现在免疫制剂作用前后肿瘤免疫微环境发生了很多不同寻常的变化，抑瘤因子的高表达，免疫杀伤的激活, 免疫耐受的抵抗，同时通过追踪2015年Nature immunology的最新报道，CD5+T细胞的改变引起了我们的关注。.传统观念中，CD5是TCR负调控因子。而经我们研制的疫苗制剂作用后在病变局部高表达，这给了我们有趣的信号。2015年Fulton等 （Fulton et al., Nature immunology, 16(1), 107-119(2015)从多角度为我们证实了CD5在固有免疫和获得性免疫中的重要作用。文中指出随表达细胞分化阶段的不同，CD5可对T细胞抗原受体和B细胞抗原受体(TCR;BCR)信号进行正向或反向调节。CD5的表达在天然CD8+T细胞中与自我识别能力负相关。而，在对外源性抗原的识别中，CD5高表达的CD8+T细胞有更好地的反应性和分化性,同时CD5高表达的T细胞池表现出更多的有效克隆募集和扩张,以及炎症反应性信号的增强。因此, CD5高表达的CD8+T细胞有更好的对外源性抗原自我反应的调控能力，使T细胞在自身免疫和外源性抗原识别免疫中有了更多样性的表现。.由此，正在开展的课题是“源头”，为我们迸出了新的“浪花”，启示我们开始新的“航程”，让我们汇聚到更大的江海，得以越发深入的了解——HPV与宿主免疫的世界，并由此找到契机，让科研结果积极向临床转化.