一个Dbl家族新成员——K294的功能鉴定及与肿瘤恶性表型之间的关系

近些年研究表明：Rho家族通过细胞骨架的重组对肿瘤细胞的生长、分化、浸润、转移具有重要的调控作用，而Dbl家族癌基因又通过GTP-GDP交换控制着Rho家族分子的活性。在人类基因组计划完成后，我们利用大量解密的基因信息，通过生物信息学分析，发现了一个新的、重要的Dbl家族癌基因K294（暂定名）。我们的初步研究显示，它不仅具有Dbl家族癌基因特有功能区- - DHPH结构域，而且还对通路中的下游信号分子具有明显的转录因子调控活性，具有明显的癌基因特征。是一个很值得研究的新的癌基因。本项目旨在阐明K294的体内调控对象（即对主要Rho家族分子的体内外激活作用）及其信号传导通路，通过该基因在临床常见肿瘤中的表达推测其在肿瘤发生发展中的作用。为肿瘤的病因及分子靶向治疗提供分子生物学依据。

近些年研究表明，Rho家族通过细胞骨架的重组对肿瘤细胞的生长、分化、浸润、转移具有重要的调控作用，而Dbl家族癌基因又通过GTP-GDP交换控制着Rho家族分子的活性。在人类基因组计划完成后，我们利用大量解密的基因信息，通过生物信息学分析，发现了一个新的、重要的Dbl家族癌基因K294GEF。在本项目的研究中，我们用生物信息学软件对该基因进行了结构域分析及序列比对，发现该基因具有Dbl家族癌基因特有功能区--DHPH结构域，但是与大多数Dbl家族成员同源性较低。用Realtime荧光定量PCR检测了其在48种组织中的表达情况，结果显示在肺中表达最高；在转录因子活性分子试验中，我们通过双荧光素酶报告基因检测到该分子对myc及ISRE等下游小分子具有转录因子活性调控作用，提示该基因的下游信号通路可能与JAK-STAT信号通路有关；通过GST-Pulldown和免疫荧光检测发现K294GEF在体内的GEF活性主要是针对RhoA具有激活作用，并发现高表达K294GEF的细胞，其增殖、侵袭及体外成瘤能力均有明显增强的趋势，但是其迁移能力未见明显变化，说明K294GEF主要通过RhoA影响肿瘤的侵袭，增殖和成瘤能力。