n-3HUFA对银鲳性类固醇激素分泌的影响及与卵黄发生的关系研究

n-3 HUFA is essential for the ovary development in marine fish, and also, it could affect the vitellogenesis by regulating the level of sex steriod homone. However, the regulation mechanism of n-3 HUFA on sex steriod homone secretion in fish, and the differences of the regulation in the previtellogenic, vitellogenic and postvitellogenic stages are unclear until now. Thus, this program studies the effects of n-3 HUFA on serum sex steriod homone levels during the period of different vitellogenesis stages, by the methods of radioimmunoassay, to verify the relationship among n-3 HUFA, sex steriod homone and vitellogenesis; On these bases, analyzes the serum gonadotrophin (GtH) levels, including follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH), and the ultrastructure of GtH cells in pituitary, to explore the regulation of GtH on sex steriod hormone secretion uder the condition of different levels of n-3 HUFA; analyzes the gene expression of estrogen receptor alpha and ovarian p450 aromatase a at the different n-3 HUFA levels, to reveal the molecular basis of the regulation of n-3 HUFA on sex sterriod hormone secretion. The results of this program could provide scientific basis for revealing the regulation mechnism of n-3 HUFA on sex steriod hormone secretion in marine fish, and establish theory basis for research on the regulation mechanism of fatty acid on the gonad development in marine fish.

n-3HUFA不仅是海水鱼类卵巢发育所必需的营养素，其还可通过调节性类固醇激素的水平进而影响卵黄的生成。然而，关于n-3HUFA是如何调节鱼类性类固醇激素的分泌，及其调节作用在卵黄发生前期、发生期及发生后期是否有所不同目前仍未可知。因此，本项目拟利用放射免疫技术研究在卵黄发生不同时期n-3HUFA对银鲳血清性类固醇激素水平的影响，探明n-3HUFA、性类固醇激素和卵黄发生三者之间的相关性；在此基础上，研究GtH在卵黄发生不同时期的分泌水平及脑垂体GtH细胞的超微结构，探讨GtH对性类固醇激素分泌的调节作用；利用荧光定量PCR技术研究雌激素受体与卵巢芳香化酶基因在组织中的基因表达情况，探索n-3HUFA影响性类固醇激素分泌的分子基础。项目的研究成果对于揭示n-3HUFA在卵黄发生不同时期对鱼类性类固醇激素分泌的调节作用机理具有重要意义，为进一步开展脂肪酸调控鱼类性腺发育机制的研究奠定基础。

n-3 LC-PUFA 不仅是海水鱼类卵巢发育所必需的营养素，其还可通过调节性类固醇激素的水平进而影响卵黄的生成。本项目研究分析了在卵黄发生不同时期n-3 LC-PUFA 对银鲳血清性类固醇激素水平的影响，探明了n-3 LC-PUFA、性类固醇激素和卵黄发生三者之间的相关性；研究了GtH 在卵黄发生不同时期的分泌水平；并利用荧光定量PCR 技术揭示了雌激素受体与卵巢芳香化酶基因在组织中的基因表达情况。实验分别以100%鱼油（FO）、70%鱼油和30%大豆油（FSO）、30%鱼油和70%大豆油（SFO）、100%大豆油（SO）为脂肪源配制等氮、等能、等脂的4组饲料，用于雌性银鲳亲鱼。研究结果表明：血浆E2、T含量在卵黄发生过程中呈现逐步升高的趋势。饲料中较高的n-3 LC-PUFA可有效提高血浆E2、T含量；血浆卵黄蛋白原含量在卵黄发生中期与后期均显著性升高。在卵黄发生初期，FO和FSO饲料组血浆卵黄蛋白原含量均显著高于SO饲料组；血浆FSH、LH含量在卵黄发生期间均显著性升高。FO与SO饲料组FSH含量在卵黄发生后期出现显著性的下降；克隆获得了雌激素受体α的全系列，长度为2619 bp，编码629个氨基酸；克隆获得了卵巢芳香化酶（Cyp19a1a）基因的全系列，长度为1896 bp，编码区：76-1637 bp，编码521个氨基酸；在卵黄发生中后期，肝脏与卵巢中ERα基因表达量均显著高于卵黄发生前期；饲料n-3LC-PUFA与卵黄发生时期对组织中ERα基因表达量均具有显著性影响；Cyp19α1α表达量在卵黄发生中后期显著升高。在卵黄发生中期，FO与FSO饲料组Cyp19α1α表达量显著性高于SO饲料组；适宜的饲料n-3LC-PUFA含量可明显改善银鲳卵黄发生中、后期组织中的抗氧化水平；肝脏LPL与FAS以及卵巢FAS活性及表达量在卵黄发生中后期显著升高，饲料中较高的n-3 LC-PUFA降低了组织中FAS活性及其表达量，但提高了LPL活性及表达量；卵巢n-3/n-6比例、ARA、EPA、DHA以及n-3LC-PUFA含量均随着饲料中n-3LC-PUFA含量的升高而升高。项目的研究成果对揭示n-3 LC-PUFA在卵黄发生不同时期对鱼类性类固醇激素分泌的调节作用机理具有重要意义，为进一步开展脂肪酸调控鱼类性腺发育机制的研究奠定了基础。