Vγ9Vδ2 T 细胞介导的再生障碍性贫血免疫病理机制研究

Acquired aplastic anemia (AA) is an immune-mediated bone marrow (BM) failure attacked by auto-reactive effector T cells with BM as the main target organ. Vγ9Vδ2 T cells were believed to bridge the innate and adaptive immune responses, they can control development and progression of autoimmunity by interactiving with several lymphoid/immune cells, such as CD8+ cytotoxic T cells (Tcyt)、dendritic cells (DCs) and regulatory T cells (Tregs), but little was known regarding the function of Vγ9Vδ2 T cells in AA. We will measure the frequency of Vγ9Vδ2 T cells in AA by flow cytometry (FACS), detect the migratory ability of Vγ9Vδ2 T cells by chemotaxis assay, perform cocultures of Vγ9Vδ2 T cells/Tregs, Vγ9Vδ2 T cells/Tcyt or Vγ9Vδ2 T cells/DCs to address the efficiency of Vγ9Vδ2 T cells-mediated immunosuppression for Tregs and activation for DCs/Tcyt, and evaluate cells proliferation by the Brdu ELISA kit and absorbance taken as the ability of proliferation. CD34+ HSC were purified from umbilical cord by miniMACS immunomagenetic method and cultured in semisolid media in the presence of Vγ9Vδ2 T cells to address whether AA Vγ9Vδ2 T cells could suppress hematopoietic colony formation. Our study would be of great helpful to further understand the role of Vγ9Vδ2 T cells in the pathogenesis of AA with an intention to probe novel immunosuppressive strategies for AA.

再生障碍性贫血（AA）是一种自身反应性T淋巴细胞攻击靶器官所致的骨髓衰竭性疾病。Vγ9Vδ2 T细胞为一种特殊的T细胞亚群，兼具固有免疫细胞与获得性免疫细胞双重功能。新近研究发现其可与调节性T细胞(Tregs)、CD8+细胞毒性T细胞（Tcyt）及树突细胞（DCs）等多种免疫细胞相互作用，但其在AA病理生理机制国内外迄今未见报道。本课题拟研究AA：①Vγ9Vδ2 T细胞数量；②Vγ9Vδ2 T细胞迁移至骨髓的趋化功能；③纯化Vγ9Vδ2 T细胞体外与各淋巴细胞亚群共培养，明确其激活DCs及Tcyt、抑制Tregs的能力；④纯化Vγ9Vδ2 T细胞与造血干细胞（HSC）共培养，明确其HSC的直接杀伤效应。上述研究有助于阐明Vγ9Vδ2 T细胞在AA发病机制中的起始及后续效应，同时解答我们前期工作中尚未解决的关键性科学问题： Tregs缺陷的免疫机制，亦为开发新型AA免疫抑制疗法提供理论依据。

再生障碍性贫血（AA）是一种自身反应性T淋巴细胞攻击靶器官所致的骨髓衰竭性疾病。Vγ9Vδ2 T细胞为一种特殊的T细胞亚群，兼具固有免疫细胞与获得性免疫细胞双重功能。新近研究发现其可与调节性T细胞(Tregs)、CD8+细胞毒性T细胞（Tcyt）及树突细胞（DCs）等多种免疫细胞相互作用，但其在AA病理生理机制国内外迄今未见报道。本课题研究了AA：①Vγ9Vδ2 T细胞数量；②Vγ9Vδ2 T细胞迁移至骨髓的趋化功能；③纯化Vγ9Vδ2 T细胞体外与各淋巴细胞亚群共培养，明确其激活DCs及Tcyt、抑制Tregs的能力。本课题已完成：① AA患者(初诊及CR)骨髓/外周血以及正常对照骨髓/外周血γδT细胞数量的检测；② AA患者骨髓/外周血以及正常对照骨髓/外周血γδT细胞亚型的检测； ③ γδT细胞表面抑制性受体和活化性受体 (NKG2D和NKG2A)表达水平的检测；④ γδT细胞表面CD45RA和CD27表达情况；⑤ γδ T细胞表面趋化因子受体的检测以及骨髓和外周血上清中相应趋化因子的检测；⑥ 纯化的γδT细胞体外与CD4+及CD8+T细胞共培养，探究γδT细胞对CD4+/CD8+T细胞增殖影响.重要结果：重要结果: ① AA患者(初诊及CR)骨髓/外周血以及正常对照骨髓/外周血γδT细胞数量的检测结果示AA患者外周血及骨髓比例较相应正常减低；② AA患者骨髓/外周血以及正常对照骨髓/外周血γδT细胞δ2亚型较正常对照明显减低； ③ γδT细胞表面抑制性受体NKG2D无明显差异，而NKG2A则表达增高；④ γδT细胞表面CD45RA和CD27表达情况；⑤ γδ T细胞表面趋化因子受体CXCR3、CXCR4、CCR5、CCR6、CCR2表达无明显差异，骨髓和外周血上清中相应趋化因子的检测：RANTES在AA外周血及骨髓中的表达较相应正常对照明显减低，CXCL10、MCP-1及SDF-1变化不大；⑥ AA患者γδT细胞体外抑制CD4+ T细胞增殖的能力减弱上述研究有助于阐明Vγ9Vδ2 T细胞在AA发病机制中的起始及后续效应，同时解答我们前期工作中尚未解决的关键性科学问题： Tregs缺陷的免疫机制，亦为开发新型AA免疫抑制疗法提供理论依据。