microRNA-139-5p在结直肠癌发生发展中的作用及其机制研究

结直肠癌(CRC)是最常见的恶性肿瘤之一。microRNA（miRNA）是一大类参与基因转录后调控的非编码小分子RNA，与肿瘤的发生、发展密切相关。申请者前期研究发现，miR-139-5p在CRC组织中显著下调，且具有抑制CRC生长的作用，提示其可能是一个新的抑癌基因。本项目拟在此基础上，应用细胞分子生物学、实验动物学等手段从体外细胞水平及活体水平进一步研究miR-139-5p对CRC细胞恶性表型及癌变相关的细胞生命活动的影响，并进一步鉴定其靶基因，以阐明miR-139-5p调控CRC发生发展的分子机制; 同时结合临床标本，分析miR-139-5p和CRC患者预后及肿瘤临床病理表型的关系，评估miR-139-5p表达在指导治疗、判断预后中的临床应用价值。研究结果可为解释CRC的发病机制及防治在miRNA调节水平提供理论和实验依据，并为CRC的诊断、治疗和预后提供重要指导。

结直肠癌(CRC)是最常见的恶性肿瘤之一。microRNA（miRNA）是一大类参与基因转录后调控的非编码小分子RNA，与肿瘤的发生、发展密切相关。本项目在前期表达谱芯片研究中发现miR-139-5p在CRC组织中显著下调的基础上，进一步运用定量PCR技术检测了158例CRC组织中miR-139-5p的表达情况，发现与癌旁组织相比，miR-139-5p在肿瘤组织中的表达显著下降，进一步临床关联分析发现miR-139-5p表达下调患者的总生存期显著缩短，且多因素分析显示miR-139-5p表达是CRC患者的独立预后因素。功能研究发现 miR-139-5p过表达能够显著抑制CRC细胞的体外迁移和侵袭能力，抑制miR-139-5p表达则促进CRC细胞的体外迁移和侵袭能力。动物实验进一步证实miR-139-5p过表达能够显著抑制CRC细胞的活体转移能力。体内、体外实验未发现miR-139-5p表达对CRC细胞的增殖能力有显著影响。运用表达谱芯片、软件预测以及荧光素酶实验、Western blotting等实验手段发现AMFR和NOTCH1基因是miR-139-5p在CRC中的功能性靶点；siRNA介导的AMFR和NOTCH1表达抑制可以模仿miR-139-5p的功能。免疫组化检测显示，CRC组织中AMFR和NOTCH1蛋白的表达均显著上调，且与miR-139-5p的表达水平呈显著负相关。综上所述，miR-139-5p能够通过靶向抑制AMFR和NOTCH1发挥抑制CRC细胞迁移和侵袭的功能, miR-139-5p表达是CRC的独立预后因子。