清脑益髓调督电针法干预MCAO大鼠血管生成中EphB4/ephrinB2信号转导的机制

Cerebral infarction ，as a common diseases of department of neurology , severely impairs the aged and elderly people's health.Reaserch on the mechanism of EphB4/ephrinB2 signal transduction and action link of electric acupuncture treatment on cerebral infarction in the process of angiogenesis is rare.Reserch in earlier stage indicates that the electric acupuncture treatment of qingnaoyisuitioadu plays a important role in interfering central neurotransmitter 、blood flow and other aspects.Based on the reserch, hypothesis can be putted forward that the electric acupuncture treatment of qingnaoyisuitioadu could interfere EphB4/ephrinB2 signal transduction in the process of angiogenesis in MCAO （middle cerebral artery occlusion) rats. Modern new technologies and methods such as western blot、RT-PCR、lateral ventricle injection can be used , grouped comparison can be adopted , and influence of cerebral infarction on links of angiogenesis(EphB4/ephrinB2 signal transduction ) can be studied to test and verify it so as to investigate the mechanism and signal pathway of angiogenesis after cerebral infarction，which can provide theory basis for clinical treatment of cerebral infarction。

脑梗死是一种严重危害中老年人健康的神经内科常见疾病，在针刺干预脑梗死血管生成中EphB4/ephrinB2信号转导机制及作用环节方面的研究目前鲜有报道。前期临床研究表明清脑益髓调督法电针对脑梗死中枢神经递质及血液流变等方面有干预作用，据此提出假说"清脑益髓调督法电针干预MCAO（大脑中动脉栓塞）大鼠血管生成中EphB4/ephrinB2信号转导机制" ，拟应用Western blot、RT-PCR、侧脑室注射等现代新技术与新方法，采取分组比较，从形态学、蛋白表达、基因水平不同层次研究影响脑梗死后血管生成的某些环节（EphB4/ephrinB2信号转导通路）来验证假说，从而探讨该法干预脑梗死后血管生成的机制，揭示该法干预脑梗死后血管生成的作用通路，为临床治疗脑梗死提供理论依据。

目的：本项目拟通过清脑益髓调督法针刺干预MCAO大鼠，从形态学、蛋白、基因水平不同层次研究影响大鼠脑梗死后血管生成的环节，探讨该法对脑梗死后脑组织中血管生成的影响及其作用机制，阐明电针治疗脑梗死的机制，为临床治疗脑梗死提供理论依据。.方法：随机将SD大鼠分为假手术组、模型组、清脑益髓调督组及药物组；采用Longa法对实验动物进行神经功能评分、HE染色观察脑组织形态改变、TTC染色测定脑梗死面积；IHC检测脑皮层缺血区微血管密度；Weidener法进行MVD计数；共聚焦显微镜观察脑微血管形态及测量其直径；RT-PCR检测EphB4/ephrinB2 mRNA的表达；Western blot检测PI3K/src蛋白的表达。.结果:假手术组均为正常；模型组、清脑益髓调督组及药物组大鼠随术后时间延长：神经功能缺损评分、脑梗死面积、缺血侧微血管直径均逐渐减小，缺血程度均减轻，并均有统计学意义；微血管、场面积比及EphB4/ephrinB2 mRNA表达率均增多，微血管迂曲程度均明显，以术后7d为显著，均具有统计学意义，但术后3d与1d比较没有统计学意义。且在术后各时间点：清脑益髓调督组和药物组的以上指标均无明显区别，但两组与模型组相比，均有显着性差异。PI3K和src蛋白的表达：假手术组均为正常表达；模型组、清脑益髓调督组及药物组大鼠均随术后时间延长表达增加；在各时间点，以清脑益髓调督组表达最高；在术后各时间点：阻断Src，各组Src、PI3K表达均减少；阻断PI3K，各组PI3K表达均减少，Src表达无变化；同时阻断Src和PI3K，各组Src表达与单独阻断Src表达量一致，各组PI3K的表达比单独阻断PI3K的表达量少；以上均具有统计学意义。.结论:清脑益髓调督电针法能够减轻MCAO大鼠神经元的损伤，减少脑梗死面积，增加缺血区微血管的密度及场面积，促进神经神经功能恢复，增加EphB4/ephrinB2 mRNA的表达和PI3K、src蛋白的表达，推测电针法通过促进毛细血管新生、缺血区周围组织灌流，从而减轻MCAO大鼠脑组织中脑微血管的损伤、促进神经功能恢复达到有效治疗局灶性脑缺血。