骨髓间充质干细胞介导的CTGF对骨肉瘤细胞的增殖促进作用及其机制

间质细胞（如骨髓间充质干细胞，bMSCs）和细胞外因子（如结缔组织生长因子，CTGF）在肿瘤发生发展过程中的作用，目前报道不尽一致，甚至相互矛盾。我们的前期研究发现，用表达CTGF的腺病毒（Ad-CTGF）感染骨肉瘤细胞后，体内体外实验显示可促进骨肉瘤细胞生长，但程度不大。Ad-CTGF感染bMSCs后，再将bMSCs与骨肉瘤细胞混合，则在体内显示了强烈的促肿瘤生长活性(对照组无显著变化)。我们认为是bMSCs提供的微环境介导了CTGF对骨肉瘤细胞的作用，并欲从（1）bMSCs提供的微环境对CTGF蛋白的特异切割，和（2）CTGF与整合素结合介导bMSCs与骨肉瘤细胞的相互作用，两方面入手研究其机制。本项目的实施将有可能发现细胞外因子作用于肿瘤细胞的新机制，为肿瘤的治疗提供新的思路。同时，本项目提出的"正常间质细胞+细胞外因子+肿瘤细胞"的研究策略可以为其他肿瘤微环境的研究提供借鉴。

间质细胞（如骨髓间充质干细胞，bMSCs）和细胞外因子（如结缔组织生长因子，CTGF）在肿瘤发生发展过程中的作用，目前报道不尽一致，甚至相互矛盾。我们认为是bMSCs 提供的微环境介导了CTGF 对骨肉瘤细胞的作用。在本项目实施的意在证实这一假设。在本项目的实施过程中，我们构建和包装了一系列CTGF缺失突变和全长的重组腺病毒，并验证了其表达成功；我们构建了表达siRNA干扰整合素αV和β3表达的逆转录病毒，并整合与间充质干细胞上，但验证其干扰效果发现并不理想，因此改为选用整合素抗体阻断整合素的功能。在体外模拟的骨肉瘤微环境中，过表达CTGF能有效促进骨肉瘤143B细胞的增殖，且明显提高细胞划痕愈合率和穿膜细胞数。过表达CTGF后143B细胞中β-catenin、p-Akt与p-GSK3β表达水平均显著上调。加入整合素阻断性抗体可以有效的减弱CTGF对143B的促增殖作用。此外，我们还发现，CTGF的同家族成员NOV的过表达抑制了骨肉瘤143B细胞的增殖，促进了其凋亡和迁移，其作用机制可能与p38/MAPK和JNK/MAPK信号通路的激活有关。.由于本项目负责人获得该项目资助时刚回国不久，还没有固定的研究方向，因此在完成本项目中规定的内容外，还利用剩余的科研经费对感兴趣的领域进行了探索，并发现：（1）曲古抑菌素A（TSA）可以时间剂量依赖方式抑制143B细胞增殖, 阻滞细胞周期, 诱导细胞凋亡; 其诱导细胞凋亡的机制可能与活化MAPK通路中p38和JNK的活性从而激发线粒体凋亡通路有关。（2）给予果糖喂食后大鼠血浆TG、INSULIN明显升高, 并出现肥胖体征, 肝脏脂质沉积严重, 其调控脂质合成的两个关键的转录因子ChREBP和SREBP1c mRNA和核蛋白表达都明显升高, 并且它们靶向的脂质合成相关酶FAS、ACC1、SCD1 mRNA表达也显著增加。但是, 在肾脏中, 高果糖没有引起TG含量的变化, 调控脂质重新合成的基因和蛋白的表达也未发生变化。