MALAT1调控的大肠癌转移相关靶基因的鉴定及功能研究

MALAT1是我们新鉴定出的与大肠癌转移相关的一种非编码RNA基因。为进一步确定这种非编码RNA所调控的大肠癌转移相关基因及其功能，本课题拟采用RT-PCR、原位杂交和FISH技术观察它在大肠癌细胞系及大肠癌组织中的表达，分析它与大肠转移的关系；用生物信息学方法比较不同物种MALAT1基因的同源性，分析它是否含有miRNA的发夹样结构并具有类似miRNA调节基因表达的功能,预测它的潜在靶标；采用RNAi、基因转染和基因芯片技术，分析MALAT1干扰和转染前后大肠癌细胞基因表达谱的变化，找出与生物信息学预测相一致的差异表达基因，确定为MALAT1的调控靶基因；分别构建含有MALAT1和靶基因序列的目的基因质粒，共转染并观察它对靶基因表达的调控作用；体内外实验观察MALAT1干扰及转染前后靶基因表达、肿瘤细胞粘附及运动和转移能力等变化；阐明非编码RNA对大肠癌转移的基因调控机制。