Cldn-1 53-80在缺血再灌注条件下肠粘膜屏障损伤中作用及机理的研究

缺血再灌注I/R可导致肠屏障功能障碍。Claudins是一种紧密连接TJs蛋白，在维持TJs的功能中至关重要。在I/R条件下，Claudin-1的表达变化直接影响肠屏障的功能。Cldn1 53-80 是Claudin-1细胞外环中的一段，外源性Cldn1 53-80可阻断TJs的修复，影响肠屏障通透性。我们推测Cldn1 53-80可能是Claudin-1的功能区域。本研究拟通过体内、外肠屏障功能损害I/R模型，使Cldn1 53-80表达缺失或过表达，通过观察肠屏障结构及功能的变化来评价Cldn1 53-80的重要作用；通过探讨Cldn1 53-80在维持肠屏障功能中通过Claudin-1磷酸化途径来发挥作用，初步揭示Cldn1 53-80在维持肠屏障功能中发挥重要作用的机理，为阐明Cldn1 53-80在维持肠屏障功能中的重要作用提供理论论据，为I/R条件下肠屏障保护研究提供新思路。

KGF在肠道急性I/R损伤中的作用尚未见文献报道。肠上皮来源的IL-7在对其毗邻的肠上皮间淋巴细胞（IEL）的生长及动态平衡的维持过程中发挥重要作用，IEL来源的KGF可促进肠上皮细胞的生长，其表达受肠上皮来源的IL-7调控。这两个因子共同参与了消化道细胞的生长和分化过程的调控。我们推测在肠上皮细胞和IEL之间存在交互作用（Cross Talk），KGF可能对IL-7也存在调控作用，并进一步对其中的调控机制进行研究。.一、材料方法.1、用KGF作用C57BL/6J小鼠后行I/R肠道手术。用PCNA染色检测肠上皮细胞增殖率及TUNEL染色检测肠上皮细胞凋亡率。用免疫组化的方法检测紧密连接蛋白Claudin-1和 ZO-1的表达。用跨膜电阻抗（Transepithelial Resistance, TER）的方法检测肠粘膜屏障通透性。2、用WB和免疫荧光的方法检测KGF、KGF受体（KGFR）及IL-7的表达。3、用WB方法检测用抗体阻断或RNA干扰KGFR的表达后IL-7的表达，用阻断剂阻断STAT1的表达后IL-7、磷酸化及非磷酸化STAT1的表达，用RNA干扰IRF-1和IRF-2的表达后， IL-7、IRF-1和IRF-2的表达。.二、主要结果：.1、在急性I/R小鼠模型中，KGF作用显著增加粘膜湿重，RNA及蛋白的含量，增长了绒毛高度及隐窝深度，促进了隐窝细胞的增殖，并抑制了肠上皮细胞的凋亡。.2、KGF可以显著改善急性I/R所致的肠粘膜屏障通透性的改变程度。3、KGF可上调IL-7的表达。4、在KGFR被抗体阻断或RNA干扰后，用KGF作用不能引起IL-7表达升高。5、KGF作用引起磷酸化STAT1表达的升高，用雷帕霉素或AG490阻断后，KGF的作用不能上调磷酸化STAT1和IL-7的表达。6、在体内和体外研究中发现，KGF可上调IRF-1和IRF-2的表达。当IRF-1或IRF-2的表达被RNA干扰后，用KGF作用不能上调IL-7的表达。.三、结论.在急性I/R小鼠模型中，KGF对I/R所致的肠粘膜形态及肠粘膜屏障功能损伤具有明确的保护作用。.在体内和体外研究中发现，KGF可通过KGFR/STAT1/ IRF-1, IRF-2通路调控IL-7的表达，从而通过调控IEL的功能来参与肠粘膜免疫功能的调节。