腺相关病毒载体介导miR-338-3p治疗HBV相关肝癌的实验研究

研究表明恢复肿瘤细胞中表达下调的miRNA表达水平可以起重要的抗肿瘤作用。我们前期研究结果首次证明，miR-338-3p在乙型肝炎病毒（HBV）相关肝癌组织中表达显著下调，且下调表达的miR-338-3p与HBV相关肝癌的分级及转移密切相关；我们进一步研究发现miR-338-3p在不同转移潜能的肝癌细胞株及肝癌动物模型中均下调表达；体外细胞转染miR-338-3p可抑制肝癌细胞的生长，但其治疗作用不明。在此基础上，本项目提出以下设想：恢复肿瘤中miR-338-3p的表达可否能对肝癌的生长转移起到治疗作用? 为证实该假说，本课题拟将以p21-HBx转基因小鼠（模拟HBV相关肝癌）为模型，通过腺相关病毒介导等方法，在体内模型中进行miR-338-3p对肝癌治疗作用及其可能机制的实验研究。本研究将为开发以miRNA为基础的新型治疗药物提供新的试验数据；将为肝癌的预防及个体化治疗提供新的分子靶点。

miRNA与人类肿瘤的发生及进展有关。我们前期的研究表明miR-338-3p在肝癌低的表达与临床肝癌患者的肿瘤侵袭、大小相关，然而miR-338-3p在肝癌发生发展中的作用及其机制不明。为了探讨miR-338-3p对肝癌侵袭及增殖的治疗作用及其机制。本项目首先利用人工合成的miR-338-3p基因片段，克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中，成功构建pIRES2-EGFP-pre-miR-338-3p的真核表达载体及去表达载体pCAGGs-anti-miR-338-3p。在此基础上，通过肝癌细胞转染试验和动物实验等明确miR-338-3p体内、外抑制肝癌的侵袭和增殖作用，结果发现miR-338-3p对肝癌有一定的治疗作用。此外我们还进一步阐明miR-338-3p通过SMO靶基因抑制肝癌的侵袭转移，miR-338-3p还有可能通过靶向VAV3抑制肝癌细胞的增殖作用。该项目的研究结果为全面阐明miR-338-3p在肝细胞癌中的作用机制奠定理论基础, 更为肝细胞癌候选诊断分子和治疗药物的研发提供理论依据。