新筛选的石斛抗糖尿病性白内障有效成分作用机制的研究

植物活性小分子与生物大分子的相互作用及选择性是植物中药研究的前沿课题之一。我们前期研究发现:1.石斛抗糖尿病性白内障(DC)的有效成分为石斛酚和丁香酸；2.石斛酚和丁香酸的作用靶标是醛糖还原酶(AR)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)；3.石斛酚对AR和iNOS具有协同抑制作用。为探索其相互作用及选择性机制，本项目拟建立AR与iNO体外表达体系，获得高纯度重组AR及iNOS；质谱分析石斛酚、丁香酸与AR、iNOS结合特性；计算机模拟与分子对接揭示其三维定量构效关系(3D-QSAR)；通过基因定点突变,比较突变酶与正常酶对石斛酚、丁香酸的结合动力,验证3D-QSAR活性中心关键氨基酸；提取AR与iNOS共同底物的药效团特权结构及其对酶构象的改变来阐明其与石斛酚识别模式。从原子、分子力场水平阐明石斛有效成分与靶标相互作用的机制，为开发抗DC石斛制剂提供实验和理论依据，为石斛的开发利用奠定基础。