LHRH-脂膜纳米超声微泡造影剂特异性显像卵巢癌及机制研究

卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤之首，如何早期、正确诊断卵巢癌是提高患者生存率的重要因素之一。纳米声学造影剂具有直径小、穿透血管能力强的特性，其成像原理为聚集显像，它的出现为超声诊断肿瘤开创了新的应用领域。促性腺激素释放激素(LHRH)受体在卵巢癌细胞中特异性高表达，而在卵巢、子宫等正常组织中不表达。基于以上认识，本项目应用LHRH与聚乙二醇-脂质成分共价结合，制备出LHRH-聚乙二醇-脂质膜，通过冷冻-熔融超声法及微液化技术，获得LHRH-脂膜纳米超声微泡造影剂；在体外培养的卵巢癌细胞和裸鼠卵巢癌移植瘤模型上研究其主动寻靶作用和特异性增强显像效果及其机制，为卵巢癌寻找一种靶向、高效显像方法，从而为其早期定性定位诊断、治疗后复发的早期发现提供新的思路和手段。

卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤之首，如何早期定性、定位诊断卵巢癌是提高患者生存率的关键因素之一。本项目应用促性腺激素释放激素(LHRH)与聚乙二醇-脂质成分共价结合制备出LHRH-聚乙二醇-脂质膜，通过冷冻-熔融超声技术，成功制备出靶向卵巢癌的纳米超声微泡造影剂(LHRH-N-Mb) 和非靶向纳米超声微泡造影剂（N-N-Mb）。.一、本项目具体完成的技术指标：.1、制备出了靶向卵巢癌的纳米超声微泡造影剂(LHRH-N-Mb)和非靶向纳米超声微泡造影剂（N-N-Mb），其理化性质如下：.①两种微泡外观圆整，分布均匀；.②N-N-Mb和LHRH-N-Mb粒径范围分别为295～468和369～618nm，集中于360与508 nm；.③两种微泡电位均为-14.6 mV；.④室温下保存14 d后，LHRH-N-Mb理化特性与刚制备时无区别；.⑤二抗与LHRH-N-Mb、N-N-Mb结合率分别为75.6%、0.83%，表明靶向卵巢癌的纳米超声微泡造影剂微泡表面上的LHRH结合量较多，而且牢固。.2、验证了LHRH-脂膜纳米声学造影剂对卵巢癌的靶向性、饱和性和机制.将人卵巢癌OVCAR-3细胞与LHRH-N-Mb共培养后，OVCAR-3细胞周围可见LHRH-N-Mb围绕或黏附，呈花环样结构，这种靶向结合能被生物素化的LHRH抗体预先阻断，说明LHRH-N-Mb借助结合其表面上的LHRH抗体与卵巢癌细胞表面上的LHRH受体牢固结合。.3、在裸鼠卵巢癌移植瘤模型上，验证了LHRH-N-Mb的特异性增强显像效果并进行了机制探讨.体内注射靶向卵巢癌的纳米微泡和普通纳米脂质膜微泡后5 s后,裸鼠卵巢癌移植瘤的血管及实质显影均明显增强，LHRH-N-Mb较N-N-Mb显影峰值后移，持续时间长；DiI标记纳米微泡在肿瘤组织的荧光显微镜下分布情况表明纳米微泡能够通过血管内皮间隙充满组织间质。免疫荧光结果表明靶向纳米微泡能够通过血管内皮间隙与肿瘤细胞表面的受体结合。.二、取得成果.1、成功制备出靶向卵巢癌的纳米超声微泡造影剂，在分子水平为卵巢癌提供了一种靶向显像方法，为其早期定性、定位诊断及治疗后复发的早期发现提供了新的思路和手段。.2、培养了3名硕士研究生，1名获国家奖学金.3、成果以论文形式发表，SCI 1篇（已接受），CSCD核心3篇，国家、省级各1篇