IL-35 在异基因造血干细胞移植慢性移植物抗宿主病中的作用研究

The chronic graft versus host disease (cGVHD) is one of the main complications in allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT). It is caused by the donor B cells and T follicular helper cells after activation and proliferation resulting in pathological lesions in host tissues by secreting allo-antibody. IL-35 specifically secreted by Treg cells could inhibit the function of effective T cells in vivo and in vitro, and causes immune suppression by inducing the transition of Tcon cells to iTreg cells secreting IL-35. The latest studies show IL-35 could induce B cells into Breg cells. We have successfully cloned mice and human IL-35 genes and verified its function of immune suppression in vivo. We also tentatively confirmed that IL-35 could reduce the severity of cGVHD in a murine cGVHD model. In this proposed project, we plan to confirm the immune suppression function of IL-35 and its exact mechanism during the occurrence of cGVHD, and the influence of IL-35 on graft versus leukemia (GVL) effect. This study will provide experimental evidence for using IL-35 in treating cGVHD in the clinic.

慢性移植物抗宿主病（cGVHD）是异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后期的重要并发症，其发生机制是供体B细胞和滤泡辅助T细胞相互作用，分泌异源抗体产生病理损害。IL-35由调节性T细胞（Treg）特异性分泌，在体内及体外能抑制效应T细胞的功能，并能诱导Tcon细胞转化为分泌IL-35的iTreg细胞，最新研究表明：IL-35诱导B细胞转化为Breg细胞发挥免疫抑制功能。本课题组已成功克隆小鼠及人IL-35基因，在体外验证了其免疫抑制功能，并在小鼠cGVHD模型中初步证明IL-35有抑制cGVHD的作用。本项目拟明确IL-35在cGVHD发病过程中发挥的免疫抑制作用及其确切机制，以及对移植物抗白血病（GVL）作用的影响。本研究将为IL-35应用于cGVHD的临床治疗奠定理论基础。

异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）是目前能够彻底治愈血液肿瘤的最有效的治疗手段之一，但是慢性移植物抗宿主病（cGVHD）仍是移植后危及患者生命的主要并发症。虽然cGVHD的发病机制尚未明确，并同时涵盖多种临床症状，但是其通常被认为是一种自身免疫病样疾病。IL-35是IL-12家族中新近被发现的一员，许多研究均提示IL-35在自身免疫病中通过促进调节性T细胞及B细胞的功能和扩增发挥着很好的减轻病情的作用，本研究前期结果亦证明IL-35能显著减轻aGVHD小鼠病情并同时不影响移植物抗白血病复发效应。因此，本研究旨在探寻IL-35在小鼠cGVHD模型中的作用及作用机制。本研究构建了三种cGVHD小鼠模型，并利用高压水流动力学注射的方法使得IL-35在受体鼠内长期稳定表达。靶器官组织病理学检测、尿蛋白及血清中抗双链DNA抗体的检测实验结果显示在SLE-cGVHD模型以及Scl-cGVHD小鼠模型中，IL-35过表达均显著加重了cGVHD小鼠的病情，而在自身抗体和硬化病症状均发生的cGVHD模型中，IL-35虽然显著减轻了一些靶器官的损伤，但是同时显著加重了受体鼠肠道的损伤并导致其生存周期显著缩短。本研究利用流式细胞仪进一步检测并分析了受体鼠中脾脏及靶器官中的免疫细胞表型，实验结果提示IL-35可能是通过显著促进了受体鼠内促炎免疫细胞以及自身反应性B细胞的扩增显著促进了cGVHD病情进展。综上所述，本研究结果证明IL-35基因的过表达显著加重cGVHD受体鼠的病情，揭示IL-35在临床allo-HSCT中可能具有同样的恶化cGVHD病情的作用。