Nrf2-keap1-ARE信号通路是自噬调控肝星状细胞活化的重要途径

A central event in the pathogenesis of alcoholic liver fibrosis is the activation of hepatic stellate cell(HSC) induced by oxidative stress. Recent studies demonstrate that oxidative stress plays an important role in the pathogenesis of alcoholic liver fibrosis, and Nrf2-keap1-ARE pathway could protect against oxidative stress.Our previous experiments suggest that autophagy inhibitor could elevate the level of nuclear nrf2,and reserve HSC activation. Based on above reportes, we propose an hypothesis that autophagy inhibitor could reverse the activation of HSC induced by alcohol via Nrf2-keap1-ARE pathway. Our study will focus on the following aspects. First, exploring the role of autophagy in HSC activation by regulating the level of autophagy in HSC;Second, exploring the role of Nrf2-keap1-ARE pathway in reversing HSC activation by autophagy inhibitor through overexpressing or knocking-down Nrf2 or keap1 genes; Third, to investigate whether autophagy inhibitor exerts its anti-HSC activation function through Nrf2-keap1-ARE pathway on the whole animal model.All those together will lead us to develop a new strategy for therapy of alcolic hepatic fibrosis.

氧化应激致肝星状细胞（HSC）活化是酒精性肝纤维发生的中心环节。近年研究表明，Nrf2-keap1-ARE信号通路在抗细胞内氧化应激中发挥重要作用，而我们的前期研究发现自噬抑制剂能升高HSC核内nrf2水平，并发挥抑制HSC活化的作用，由此我们提出假设：自噬抑制剂可能通过活化Nrf2-keap1-ARE通路发挥逆转酒精诱导HSC活化的效应。本项目拟从以下方面开展研究：1.采用自噬抑制剂和激活剂调节HSC自噬水平，进一步明确自噬在酒精致HSC活化中的调控作用；2.沉默和过表达nrf2及keap1基因，探讨Nrf2-keap1-ARE通路在自噬抑制剂拮抗酒精致HSC活化中的地位；3.采用nrf2(-/-)/(+/+)、keap1(-/-)/(+/+)基因敲除及过表达模型小鼠，在动物水平进一步验证我们的假说，为抗酒精性肝纤维化的研究提供新思路。

背景：大量文献表明自噬在酒精性肝纤维化中起关键作用，但很少有文献报道其在肝星状细胞活化中所起的作用。本研究旨在探讨自噬在肝星状细胞活化中的调节作用，并进一步探讨其潜在作用机制。方法：分别用乙醇、3-甲基腺嘌呤（3-MA）和雷帕霉素诱导肝星状细胞HSC-T6 ，同时细胞转染si-Nrf2或si-Keap1质粒。此外，建立Nrf-2（-/-）和KEAP1（-/-）小鼠模型。评价氧化应激条件下肝组织和肝星状细胞自噬水平，肝纤维化标志物αSMA和CoL1A1的表达，以及Nrf2抗氧化反应水平。结果：乙醇处理的细胞自噬、氧化应激水平增加和肝星状细胞激活增强。自噬抑制剂可逆转酒精诱导的肝星状细胞活化和抑制肝星状细胞氧化应激。Nrf2-Keap1-ARE信号通路参与自噬调节肝星状细胞的活化及氧化应激。此外，通过体内实验研究，我们发现，抑制自噬可缓解酒精性肝纤维化模型小鼠酒精性脂肪肝的损伤，而且Nrf2信号参与了自噬调节的肝星状细胞活化。结论：自噬抑制剂可能通过Nrf2-keap1-ARE 通路发挥逆转酒精诱导肝星状细胞活化的效应。