急性白血病新基因MLAA-34及其多肽疫苗的研究

急性单核细胞白血病（AML-M5）迄今缺乏特异性的肿瘤标识分子。MLAA-34(GenBank:AY288977.2)是我们实验室用SEREX法筛选并鉴定的一个候选M5肿瘤相关抗原新基因。本项目拟对MLAA-34开展进一步研究：①扩大标本检测MLAA-34在不同肿瘤（包括M5）以及正常组织内的表达差异，确定其用于M5分子诊断的可能性；②扩大标本研究MLAA-34表达与M5患者临床特征、疾病预后间的关系，以及用于监测化疗缓解或造血干细胞移植后的微小残留病灶（MRD）、预测疾病复发的临床意义；③在我们原有白血病细胞瘤苗主动免疫治疗的基础上，设计MLAA-34多肽疫苗进行动物实验研究，以提高免疫治疗疗效为下一步临床应用奠定基础。通过以上研究，以期为急性单核细胞白血病的分子诊断、预后判定以及临床治疗提供新的研究依据。

急性单核细胞白血病（M5）迄今缺乏特异性标志分子。MLAA-34是我们实验室用SEREX法筛选并鉴定的一个候选M5相关抗原新基因。本项目对MLAA-34开展进一步研究：①完善MLAA-34在血液肿瘤细胞系及实体瘤细胞系蛋白及转录水平上表达谱，MLAA-34在急性单核系白血病细胞高表达，粒系及淋巴系中低表达；实体肿瘤细胞系中MLAA-34均有低表达，但在高转移性癌细胞株中表达高于其低转移潜能细胞株；MLAA-34沉默后U937细胞Transwell下室细胞数小于空载组及阴性对照组，MLAA-34表达水平下降后会导致U937细胞侵袭能力下降；扩大标本检测MLAA-34在不同白血病骨髓细胞以及正常PBMC的表达差异，与非M5白血病患者和健康对照相比，MLAA-34在M5中呈高表达，确定其可用于M5分子诊断。②扩大标本研究MLAA-34表达与M5患者临床特征、疾病预后间的关系，MLAA-34在初诊M5患者中表达增高，随疾病缓解而降低，且对M5患者进行随访，MLAA-34高表达的患者无复发生存期及总体生存期较短，其可用于监测化疗缓解或造血干细胞移植后的MRD、预测复发，是M5的独立预后因素。③采用生物信息学方法预测了10个MLAA-34 HLA-A*0201限制性CTL表位；经典MHC-肽结合力实验显示CP701（236ILDRHNFAI244）与HLA-A*0201分子的亲和力最强。采用重组GM-CSF、IL-4联合TNF-α体外诱导HLA-A*0201阳性健康人PBMC成功获得成熟DC。成熟DC经MLAA-34表位肽CP701负载与经免疫磁珠分选的CD8+ T细胞共培养获得特异性CTL，在体外对同时表达MLAA-34和HLA-A*0201的白血病细胞及负载CP701肽的T2细胞产生确定的特异性杀伤作用；建立荷人急性单核细胞白血病细胞THP-1的HLA-A＊0201+ hu-PBL-SCID小鼠动物模型，MLAA-34表位肽CP701、T辅助细胞表位和不完全弗氏佐剂组成的多肽疫苗可抑制荷THP-1的hu-PBL-SCID小鼠瘤体增殖，延长其生存，体内可诱导特异性CTL杀伤活性，进一步确证MLAA-34 CP701多肽疫苗体内可诱导有效的免疫应答，具有抗白血病作用。通过以上研究，MLAA-34可为M5的分子诊断、预后判定以及临床治疗提供新的研究依据。