健脾补肾活血汤含药血清体外干预强直性脊柱炎患者破骨细胞分泌RANK、MMP-3含量的实验研究

骶髂关节边缘的骨质侵蚀是强直性脊柱炎早期的放射学特点之一。现已证明，破骨细胞在骨质破坏中具有核心作用，其分泌的基质金属蛋白酶(MMPs)和细胞因子RANK在骨质破坏起到了关键作用。糖皮质激素和免疫抑制剂，能延长患者生命，但这类药副作用多毒性大，只有从中医整体观才能找到答案。健脾活血补肾汤经临床证实能够在较短的时间内控制病情。现有研究证明，此复方中的多味单药具有促进成骨细胞的增殖，改善骨质疏松作用，但对于破骨细胞的作用，却未见太多的报道，而破骨细胞在强直性脊柱炎所致骨质疏松中却有着重要的作用。本实验研究拟通过现代分子生物学和免疫学技术，观察健脾活血补肾汤对强直性脊柱炎患者破骨细胞活性的影响及其分泌的RANK、MMP-3含量的影响，探讨其修复强直性脊柱炎患者骨质破坏，改善骨质疏松的分子免疫分子免疫药理学作用机制，为进一步的研究与开发奠定一定的理论基础。

健脾活血补肾汤通过下调IL- 17表达干预诱导培养的破骨细胞的增殖、凋亡及其分泌MMP-3、OPG及RANK的功能. [摘要] 目的：观察健脾活血补肾汤含药大鼠血清体外对AS患者外周血单个核细胞（PBMC）IL- 17表达及对AS患者破骨细胞（OC）的增殖与凋亡及其表面分子的表达水平的影响，从而探讨健脾活血补肾汤修复强直性脊柱炎（AS）骨质破坏的可能机制。方法： 1.制备不同浓度健脾活血补肾汤大鼠含药血清;2 用ELISA方法检测体外培养的PBMCs上清液中IL-17水平;3将采集患者的PBMCs接种于预置爬片或骨片的24孔培养板中,用HE染色显示细胞形态;采用TRAP染色法鉴定诱导成功的破骨细胞;4取出共培养的骨片,室温染色5 min,蒸馏水冲洗后光镜下观察吸收陷窝，并进行拍照和计数。5 诱导培养的OC经不同浓度健脾活血补肾汤分别培养不同时间后，用ELISA法检测各组培养上清中MMP-3、OPG及RANK表达水平。结果：1.空白对照组的破骨细胞胞浆饱满,核仁清晰。实验各组的破骨细胞胞浆浓缩,有的细胞出现核碎裂；2. 经高、中、低三组浓度大鼠含药血清培养72h后,各组OC细胞数均较对照组减少，且其差异有统计学上意义(P<0.05)； 且各组OC凋亡率均较空白对照组高,且其差异均有统计学意义(P<0.05)；各组骨吸收陷窝面积也均较空白对照组小,且其差异均有统计学意义(P<0.05)；3. 高、中两剂量组AS患者PBMCs上清液中IL-17水平与对照组相比显著下降，且差异有统计学意义（P<0.01）,但各组含药大鼠血清对健康自愿者PBMCs上清液中IL-17表达水平的影响与对照组相比，其差异没有统计学意义（P>0.05）；6. AS患者OC上清中MMP-3、RANK水平均较对照组明显降低,且其差异具有统计学意义(P<0.05); 而OPG水平均较对照组高,且其差异有统计学意义(P<0.05)。结论：健脾活血补肾汤可能通过减少OC增殖、促进其凋亡，纠正其表面分子OPG\RANK表达失衡，从而修复炎性损伤所致的AS患者关节的骨质破坏。且其潜在的作用机制可能与下调炎症因子IL-17的表达有关。.总之，基本上按照标书的要求完成了本研究课题，只是由于实验条件的限制，更改了部分指标的检测方法，但不影响研究结论的可靠性。.