骨髓增生异常综合征“劳毒致病”的MSC、Breg/KIR机制研究

Myelodysplastic syndrome character as consumption and poisen,the features always exist in the development and transformation of it's whole process.Our researchers divided it into "deficiency of healthy qi and poison accumulatetion ""poisonous abundan and deficiency of healthy qi",which corresponding to" relative low-risk group" and "relative high-risk group" according to different patients at different stages of disease pathogenesis.Studies have found that the abnormal MSc in the pathogenesis of MDS plays a certain role; Breg is a new discovery of B cell subsets,and plays the role of "conductor" in immune network, its status is very important; at the same time, the latest study found, activating KIR genes and MDS disease progression are closely related. We want to know the mechanisms of MSC and Breg/KIR in the progression of MDS, clarify the MDS "work poisonous pathogenic" immune connotation, Breg/KIR identification equation of MDS TCM syndrome types through detecting of MDS and MDS in patients with non MSC Breg biological characteristics, function, related cytokines and activation of KIR gene index.

骨髓增生异常综合征（MDS）的“劳毒”病性特征贯穿于疾病发展与转变的整个过程，课题组根据患者不同阶段病机特征，将其分为“正虚毒蕴”和“毒盛正虚”两大证候类型，分别对应于西医的“相对低危组和“相对高危组）。有研究发现异常的MSC在MDS的发病过程中起着一定作用；Breg是近年新发现的B细胞亚群，在机体免疫网络中扮演着“指挥家”的角色，地位十分重要；同时，最新研究发现，活化的KIR基因与MDS的疾病进展密切相关。本课题通过对MDS及非MDS患者MSC生物学特性、Breg功能、相关细胞因子及活化的KIR基因等指标的检测，明确MSC及Breg/KIR在MDS进展中的作用机制，阐明MDS“劳毒致病”的免疫内涵，建立MDS中医证型的Breg/KIR辨识方程。

骨髓增生异常综合征（MDS）的“劳毒”病性特征贯穿于疾病发展与转变的整个过程，依据患者不同阶段病机的不同分为“正虚毒蕴”和“毒盛正虚”两大证候类型。目前研究发现，骨髓间充质干细胞（MSC）异常在MDS的发生发展中起重要作用；Breg在机体免疫网络中扮演着“指挥家”的角色；同时活化的KIR基因与MDS的疾病进展密切相关。本课题通过对MDS及非MDS患者MSC生物学特性、Breg功能、相关细胞因子及活化的KIR基因等指标的检测，明确MSC及Breg/KIR在MDS进展中的作用机制，阐明MDS“劳毒致病”的免疫内涵，建立MDS中医证型的MSC、Breg/KIR辨识方程。.本研究收集90例样本，包括MDS患者组60例（毒盛正虚型28例、正虚毒蕴型32例），非MDS患者组30例。①提取骨髓MSC，进行贴壁细胞形态学观察、检测免疫表型、细胞增殖以及与HSC共培养实验；②磁珠分选Th和TS细胞群，与P3代MSC共培养，细胞计数法检测增殖能力、收集共培养体系的上清液，ELISA检测细胞因子IL-4、INF-γ表达水平；③分离骨髓单个核细胞，流式细胞术检测Breg细胞比例；④磁珠分选HSC，与Breg细胞共培养，应用Transwell技术检测HSC趋化功能；⑤ELISA检测骨髓液中细胞因子IL-10、IL-4、INF-γ、TGF-β1表达水平；⑥分离外周血单个核细胞，抽提DNA，PCR检测活化KIR基因。.研究结果表明：1.相比于正常对照组，MDS组MSC在形态上表现出衰老征象，同时MSC的增殖能力、对HSC的支持作用也低于正常对照组，而MDS-MSC对Th以及Ts细胞的增殖能力及IFN-γ、IL-4分泌的抑制作用高于正常对照组；2.免疫抑制性Bregs参与了MDS发病的负调控机制，MDS患者Breg数量增高可触发异常克隆造血细胞的免疫逃逸；3.Bregs的负调控作用引起 IL-10、TGF-β1、IL-4、IFNγ等细胞因子释放增多，可致无效造血及造血细胞过度凋亡。MDS毒盛正虚型患者外周血IL-10、 IL-4、TGF-β1、INFγ显著高于正虚毒蕴型，在一定程度上反映了病情的危度及预后；4.KIR基因的多态性与MDS发病有关，KIR活化型基因2DS3、2DS4高表达，易导致对NK、T细胞传递激活信号异常，这可能是MDS造血干细胞无效造血的重要因素和“劳毒致病”的物质基础之一。