Menin介导神经病理性疼痛的作用及其机制

神经病理性疼痛是一世界性难题，Menin是MEN1基因编码多组织表达的核蛋白。先前研究中：疼痛模型小鼠痛阈降低同时，Menin高表达于背角神经；鞘内给药Menin单抗显著提高模型小鼠痛阈，减少背角神经放电频率及fEPSP，下调NMDA受体NR表达，提示Menin可能参与痛阈调节。鉴于1）Menin参与突触形成；2）背角神经元NF-κB沉默表达对突触、电生理及NR影响与Menin过表达相同；3）NF-κB抑制剂增加Menin过表达神经元NR表达，其它信号分子抑制剂则无影响；4）NF-κB与突触形成相关联，推测Menin可能通过NF-κB促突触形成参与中枢敏化。研究拟以神经病理性疼痛模型探讨Menin与痛阈、突触及NF-κB的关系；进而以脊髓源神经干细胞为工具观察Menin过表达或沉默表达对突触影响及与NF-κB的关系。研究具有源头创新性，将可能为中枢敏化理论提供新依据，为疼痛治疗提供新靶点。

肿瘤抑制因子Menin是MEN1基因编码的核蛋白。有报道神经元突触的形成需要突触后膜Menin蛋白的表达参与。本研究以C57BL/6小鼠保留性神经损伤（SNI）和慢性压迫性坐骨神经损伤（CCI）为神经病理性疼痛模型，通过鞘内注射MEN1反义寡核苷酸（ASO）表达抑制脊髓Menin水平，von Frey针丝和热力学平板分别检测小鼠双侧跖部机械及热刺激疼痛行为学变化。免疫荧光组织化学测定脊髓Menin及相关蛋白表达特征，Western Blotting（WB）及定量PCR（q-PCR）分别测定脊髓背角Menin蛋白及MEN1 mRNA水平。进而通过在体和离体脊髓电生理测定Menin在SNI小鼠脊髓突触可塑性中的作用。在此基础上通过诱导分化神经干细胞为脊髓神经元，同时过表达或/和沉默表达MEN1，以细胞膜片钳、免疫细胞化学和WB测定并分析Menin与细胞兴奋性、NMDA、NF-κB之间的关系。. 研究发现：1）在C57BL/6小鼠成功建立SNI及CCI神经病理性疼痛模型，获得机械性和热力学刺激疼痛反应曲线；2）在SNI及CCI损伤后疼痛阈值降低保持稳定的时间窗内通过预先置入的鞘内导管注射MEN1 ASO或小干扰RNA（siRNA），结果发现连续注射3天后机械性疼痛阈值显著升高，热刺激疼痛收缩潜伏期并无改变，而热刺激收缩持续时间显著缩短，随着MEN1 ASO或siRNA的不断代谢清除，疼痛行为则表现出逐渐向给药前水平变化的特征；3）SNI、CCI后脊髓背角Menin蛋白及MEN1 mRNA表达随时间呈现先上调后下调，第14天达到高峰的特征；免疫荧光组织化学发现脊髓Menin主要与神经元共表达；4）脊髓电生理学发现MEN1 ASO可以减少神经损伤诱导的脊髓自发放电频率，降低脊髓场电位（fEPSPs），同时兴奋性突触后电流（EPSCs）的振幅和频率均降低；5）脊髓Menin通过调控谷氨酸/GABA水平失衡达到易化疼痛发生的目的，而MEN1 siRNA可以翻转这种谷氨酸与GABA之间的失衡；进一步发现这种Menin调控的兴奋与抑制神经递质之间的平衡失调是通过谷氨酸脱羧酶65来实现；6）NF-κB通路的活化是SNI后Menin参与疼痛发生发展的下游信号机制；7）脊髓神经元MEN1过表达和沉默表达进一步证实Menin具有调控神经元电活动及突触可塑性作用。