瓦勒氏变性中雪旺细胞亚群的分离及其在体内的转归研究

在周围神经损伤后，神经组织会发生瓦勒氏变性；在这一损伤变性及其之后的再生过程中，神经组织中的雪旺细胞起着重要作用并发生着诸多变化。但是，目前对于雪旺细胞在这个神经变性及神经再生过程中的变化规律并不清楚。本课题组通过流式细胞分析研究发现，发生瓦勒氏变性的神经组织中的雪旺细胞可以根据其表达P75NTR（即CD271）的量被划分为两个亚群。为了分析这两种细胞亚群的细胞生物学特性的异同及其两者间相互的关系，本项目拟通过小鼠实验研究来观察瓦勒氏变性的坐骨神经组织中P75NTR高表达细胞群与低表达细胞群之间的表型差异、两者在体外对不同生长因子刺激的反应差异、两者对于周围神经再生的促进作用大小差异及两者在体内的长期转归差异，从而来证明这两种细胞亚群的存在并初步探索其在周围神经再生中的作用,为雪旺细胞移植及其在组织工程人工神经构建等方面的临床应用提供理论基础及动物实验依据。

本项目原计划通过体外的实验研究来观察瓦勒氏变性的小鼠坐骨神经中两种雪旺细胞亚型的表型特征差异、对不同生长因子刺激的反应差异及其两者在体内的转归差异来证明两种细胞亚群的存在及其相互的关系；从而有助于在细胞生物学水平进一步深入认识瓦勒氏变性时雪旺细胞的去分化和再分化过程，及其不同状态细胞在周围神经再生中所起的作用；从而进一步了解周围神经再生的机制，为雪旺细胞移植及其在组织工程人工神经构建等方面的临床应用提供理论基础及动物实验依据。研究计划分为三部分：1）瓦勒氏变性中雪旺细胞的两种亚群的表型比较，2）瓦勒氏变性中雪旺细胞的两种亚群的体外生物学特性比较，3）瓦勒氏变性中雪旺细胞的两种亚群的在体内的转归比较。从本课题组的实验结果来看，课题原来的假设：许旺细胞通过P75NTR表达量的高低被划分为2个亚群，是不成立的，但是许旺细胞中各类标志物表达在发育、成年及体外培养过程中会发生变化。此本研究将调整为：各主要的许旺细胞标志物在体外表达情况的研究。随后，课题组通过对发育阶段、成年小鼠的坐骨神经中许旺细胞的各类特异性标志物的表达情况的免疫荧光及Realtime RT-PCR的检测，来从蛋白质水平和RNA水平来判断分析这些标志物的表达量及其在体外培养过程中的变化情况。此外，分离培养和富集许旺细胞的过程中，本课题组还发现了用中性蛋白酶进行细胞差速消化纯化的方法由于先前使用的复合胶原酶法。最后，本课题组部分经费资助了相关课题“应用肌膜管修复周围神经缺损的研究”，并负责了动物手术和部分结果检测（HE及免疫荧光检测）工作。在本课题经费支持下，目前在SCI收录期刊发表论文2篇、参加国际会议1次、培养博士研究生1名及硕士研究生4名。