糖尿病肾病瘀血阻络证与RAS的相关性及化瘀通络中药的干预作用

现代医学已证实糖尿病肾病（DN）的发生和发展与肾素-血管紧张素系统（RAS）失常密切相关, RAS阻断药能够延缓DN的进展（A级证据），但其临床应用受限。中医学者们在临床实践中已形成一个共识，即"瘀血阻络"几乎是贯穿DN全过程的主要机制，因此了解DN中RAS和瘀血阻络证存在何种关系，对于中医认识DN发病机制和防治DN具有重要意义，但目前未见相关报道。本项目据此而设。即以中医络病理论为指导，对DN大鼠模型进行血瘀络阻系列指标检测，确立DN大鼠瘀血阻络模型：1、观察该大鼠模型及其用化瘀通络药干预后血瘀络阻指标和RAS组分的变化，从正反两个方面进行相关性分析，以期揭示DN中RAS与瘀血阻络证之间存在何种内在联系；2. 用化瘀通络药对该模型和高糖培养的足细胞进行干预，揭示化瘀通络药的作用靶点是否在RAS的相关位点上，探求该方防治DN的可能作用途径。

糖尿病肾病（DN）发生发展与RAS失常密切相关。“瘀血阻络”是DN主要机制，DN治疗多遵循化瘀通络法则，已成为中医肾病领域共识。本项目基于现代医学与中医学对DN不同角度的认识，旨在探索RAS和瘀血阻络证的关系，并探求化瘀通络的作用靶点是否与RAS相关位点有关。①瘀血阻络DN模型的建立：高糖高脂联合STZ腹腔注射制备大鼠糖尿病（DM）模型。16周末对肾皮质进行大体及光镜、电镜观察，与空白对照组比较，模型组（M组）肾脏体积增大，肾小球肿胀肥大，基底膜均质性增厚且结构杂乱，系膜基质增多，足突节段性融合，呈现DN典型病理改变；加之24h尿蛋白定量升高，表明DN模型制备成功。检测血液粘稠度和流动性的主要指标（血脂、血流变、血小板、血凝），均提示血液存在高粘、高凝状态，结合爪掌、尾静脉紫暗瘀血表现，与瘀血阻络中医证候特征相符，表明DN模型存在瘀血阻络证候。②化瘀通络中药对瘀血阻络DN模型的干预作用：对模型大鼠灌胃化瘀通络中药颗粒混悬液16w。与M组比较，治疗组大鼠肾小囊腔较宽，系膜增生有所改善，超微结构清晰，基底膜节段增厚，足突少部分融合；24h尿蛋白定量、肾功能及肾脏指数均有显著改善，提示化瘀通络中药对DN具有肾保护作用，也反证了“瘀血阻络”的存在。比较大鼠外在瘀血表现及血液相关指标，均提示化瘀通络中药能改善DN大鼠瘀血阻络证候。③化瘀通络中药对DN模型RAS组分改变的影响：化瘀通络中药干预模型大鼠16w，留取肾皮质，检测RAS各组分，模型ACE-AngⅡ-AT1轴各组分均上调、ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴各组分均下调，化瘀通络中药可一定程度拮抗此异常表达，对部分靶点（ACE蛋白、ACE2 mRNA、Mas mRNA表达）作用优于阳性对照药厄贝沙坦。④DN模型RAS组分与瘀血阻络证的相关性分析：血浆粘度和不同切变率下全血粘度与肾皮质ACE2 mRNA及其蛋白的表达均呈负相关，与ACE mRNA及其蛋白的表达均呈正相关。⑤化瘀通络中药对高糖刺激下足细胞的干预作用：对许可条件下条件性永生化小鼠足细胞进行3个时间点12个中药浓度的高糖加药MTT试验，高糖可抑制足细胞增殖，中药可部分逆转此效应，最佳浓度为100ug/ml。对非许可条件下分化成熟的足细胞行高糖加最佳浓度药物干预，高糖能促进Col-Ⅳ分泌、上调胞浆ACE、下调ACE2表达，中药干预48h能不同程度逆转以上效应。