以PXR、CAR为核心的调控网络、作用机制及其指导环磷酰胺个体化用药的临床转化研究

目前药物反应个体差异的机制研究遭遇"瓶颈"，如本实验室近6年对环磷酰胺的药动学显著个体差异机制研究表明，其主要代谢酶CYP3A4、2B6、GST等的遗传多态性只能解释33%药动学个体差异。网络药理学的兴起及本人研究结果提示，代谢酶/转运体仅是药物代谢局部节点，而PXR和CAR及miRNA对代谢酶/转运体的直接与间接调控起至关重要作用。本人在国家自然基金（30873025）资助下，在细胞水平及人体水平对PXR基因5'非编码区的两个新发现突变功能进行了系统研究，发现这两个突变对3A4的表达有显著影响，同时发现mir-148a对于PXR的调控作用受3'非编码区基因多态性的显著影响。本课题将在前期研究基础上，探索PXR、CAR编码区和3'非编码区的遗传多态性及相关miRNA组成的调控网络对代谢酶的表达调控机制，并将实验室研究结果进行临床转化，明确调控环磷酰胺代谢的关键节点，实现环磷酰胺个体化应用。

目前药物反应个体差异的机制研究遭遇“瓶颈”, 以环磷酰胺为代表的免疫抑制剂的应用存在显著的个体差异，但机制一直不清楚，这制约了其临床应用。前期的相关研究只局限在代谢酶、转运体的基因多态性，本研究系统地考察了PXR、CAR等核受体、CYP2B6、CYP2C19、GST等代谢酶、NFκB炎症信号通路相关分子等的基因多态性对环磷酰胺、环孢素等免疫抑制剂的个体差异的影响。.研究发现：基于CYP2B6 -750C>T和CYP2C19*2的多重线性回归模型可以解释4-OHCPA个体差异的48.4%。CYP2C19*1*1和CYP2B6 -750 TT基因型的4-OHCPA浓度最高，为强代谢者（EM）；CYP2C19*2*2和CYP2B6 -750 CC基因型的4-OHCPA浓度最低，为弱代谢者（PM），其余为中等代谢者（IM）。EM、IM、PM组的4-OHCPA浓度中位数分别为26.1 ng/mL，11.9 ng/mL和6.7ng/mL，有显著差异（p<0.001）。Logistics回归分析表明，CYP2C19*2是骨髓抑制、感染和胃肠道反应共同的保护因素（OR=0.102，0.201和0.126）。EM组发生骨髓抑制和胃肠道反应的风险显著高于IM组（OR=7.538和OR=7.579）。表明CYP2C19*2和CYP2B6 -750 C>T突变构成的基因模型能够有效预测4-OHCPA的血药浓度，并对不良反应和短期疗效有较好的预测作用。.同时发现ABCB1 1236TT-2677TT-3435TT是影响环孢素血药浓度的重要因素。通过ABCB1分层后，在ABCB1 2677 TT与 3435 TT基因型中, NFKB1 −94 ATTG ins/ins 基因型患者的血药浓度显著高于 −94 ATTG del/del基因型患者，这结果提示在个体化应用环孢素时，上述基因多态性为重要考虑因素。