TWIST在胃癌血管生成中的调控作用与机制

TWIST是具有bHLH结构的转录因子，近年来发现其参与了多种肿瘤的发生、侵袭、转移。最近发现TWIST可参与肿瘤血管生成，但机制仍不明确。我们前期工作首次研究了TWIST与胃癌的关系，发现：TWIST在胃癌组织和细胞系中均过表达，体外试验研究表明TWIST通过影响胃癌细胞的凋亡、侵袭、转移和血管的生成参与胃癌发生发展，动物试验证实抑制TWIST能显著抑制肿瘤生长，因此TWIST很可能成为针对胃癌细胞及新生血管内皮细胞双向治疗的靶分子；同时我们通过建立缺氧模型，发现了TWIST的表达受HIF-1的调控。本研究结合课题组与国际上肿瘤血管生成最新研究进展，拟利用串联亲和纯化、双向电泳、CHIP和启动子芯片等高通量技术，研究与TWIST相互作用的分子及受其调控的血管生成相关靶基因，阐明TWIST在胃癌血管生成中可能的机制，为深入理解胃癌血管生成的机制奠定理论基础，为治疗胃癌和预防复发提供新思路。

TWIST是具有bHLH结构的转录因子，近年来发现其参与了多种肿瘤的发生、侵袭、转移。最近发现TWIST可参与肿瘤血管生成，但机制仍不明确。我们前期工作初步研究了TWIST与胃癌的关系，在本基金资助下，我们进一步的工作发现：（1）胃癌组织的免疫组织化学结果统计学分析表明：TWIST在中、低分化腺癌中的阳性率高于高分化腺癌)，在有淋巴结转移的胃癌中TWIST阳性率高于无淋巴结转移的胃癌，（2）TWIST小干扰RNA转染的胃癌细胞增殖、侵袭、迁移以及体内成瘤能力均降低，（3）在缺氧或转染HIF-1后，twist表达升高；通过建立缺氧模型，发现了TWIST的表达受HIF-1的调控；利用生物信息学分析，发现在TWIST的启动子转录启始点附近-1442～+152范围内存在HRE可能的结合位点；构建了报告基因载体，双荧光素酶报告基因系统检测证实在-1442～+152的区域存在着具有转录活性的HIF-1的结合位点。（4）利用ChIP和EMSA的方法证实了TWIST启动子距转录起始位点的-1003～-997处存在HIF-1的结合位点，HIF-1是通过该位点发挥基因激活作用的。（5）体内试验表明TWIST低表达的细胞移植瘤明显减小，裸鼠瘤体组织的微血管密度减少。体外细胞培养上清中VEGF浓度减少。VEGF是Twist作用的下游分子之一