稳心颗粒干预PKC-SRF-miR-1通路调控Cx45/Cx43平衡抑制AMI后心律失常的研究

Acute myocardial infarction (AMI) patients have potentially lethal arrhythmia risk. Studies confirmed that both connexin 43 and connexin 45 (Cx43 and Cx45) are closely related to the arrhythmia onset. But the Cx45/Cx43 balance how to change after AMI? Relationship with the arrhythmia onset? What is the molecular mechanism controlling? These issues are still unclear partly. Wenxinkeli, a traditional Chinese medicine of Yiqihuoxue, exactly have antiarrhythmic efficacy. Literatures and previous works have indicated that Wenxinkeli not only have the known ion channel blocking effect, but also may have a gap junction protective effect. This study produces a model of AMI in rats and myocardial hypoxia injury model, and regards the changes of the Cx45/Cx43 proportion, distribution and phosphorylation levels as indications to observe the relationship between the Cx45/Cx43 imbalance and the arrhythmia onset after AMI, and with protein kinase C ( PKC ) as the center to research the signal transduction process of PKC-SRF-miR-1 pathway in regulation of Cx45/Cx43 balance. From the gap junction remodeling and its upstream signal transduction and regulation of miRNA angle, to reveal the mechanism of arrhythmia suppression of Wenxinkeli by regulation of Cx45/Cx43 balance through intervention of PKC-SRF-miR-1 pathway after AMI.

急性心肌梗死(AMI)患者具有潜在性致死性心律失常发生的风险。研究证实缝隙连接蛋白43和45 (Cx43和Cx45)都与心律失常发病密切相关。但是AMI后Cx45/Cx43平衡如何变化？与心律失常发病的关系如何？分子调控机制是什么？这些问题尚不完全清楚。益气活血中药稳心颗粒抗心律失常疗效确切，文献和前期工作提示稳心颗粒除已知的多离子通道阻滞作用外，还可能具有缝隙连接保护作用。本项目制作大鼠AMI模型和心肌细胞缺氧损伤模型，以Cx45/Cx43的比例、分布和磷酸化水平的改变为指征，观察Cx45/Cx43失衡与AMI后心律失常发病的关系；以蛋白激酶C(PKC)为中心，研究PKC-SRF-miR-1通路调控Cx45/Cx43平衡的信号转导过程。从缝隙连接重构及其上游信号转导和小RNA调控角度，揭示稳心颗粒干预PKC-SRF-miR-1通路调控Cx45/Cx43平衡抑制AMI后心律失常的作用机制。

急性心肌梗死患者具有潜在性致死性心律失常发生的风险，严重威胁人类的健康。心肌梗死后心律失常已经成为导致心梗病人近期和远期死亡的主要原因。西药多离子通道阻滞剂虽然能有效抑制心律失常的发生，但却不能降低猝死率。并且抗心律失常西药由于毒副作用，限制了其在心律失常远期防治方面的应用。目前发现一些具有抑制心室重构作用的非离子通道阻滞剂有抗心律失常作用，使心律失常更加重视对病因的治疗。研究证实缝隙连接蛋白43和45(Cx43和Cx45)都与心律失常发病密切相关。但是心肌梗死后Cx45/Cx43平衡如何变化？与心律失常发病的关系如何？分子调控机制是什么？这些问题尚不完全清楚。益气活血中药稳心颗粒抗心律失常疗效确切，文献和前期工作提示稳心颗粒除已知的多离子通道阻滞作用外，还可能具有缝隙连接保护作用。本项目通过整体动物实验和细胞实验，观察了稳心颗粒对心肌梗死后心律失常发生、心肌组织Cx45/Cx43表达以及PKC-SRF-miR-1通路的影响。结果显示，心肌梗死模型大鼠术后4周，发生了心脏电生理特性的改变，表现为室颤阈值降低，心肌细胞动作电位复极时程延长。心梗后室颤发生与心肌缝隙连接异常有关，在Cx45/Cx43平衡方面，Cx43起了较为重要的作用，心肌Cx43的阳性表达面积的减小对于预测心梗后室颤的发生具有一定的参考意义。PKC-SRF-miR-1通路蛋白和小RNA表达的异常是引起心肌缝隙连接异常的重要影响因素。稳心颗粒能够在一定程度上调节PKC-SRF-miR-1通路，保护心肌缝隙连接，抑制心梗后室颤的发生。并且稳心颗粒还能够改善心室重构，抑制心肌细胞凋亡，有利于改善心梗后心律失常的产生基质。在细胞水平上，本项目同样观察到了稳心颗粒对心肌细胞缺氧损伤和对缝隙连接蛋白表达的有益作用。此外，本项目研究结果还提示益气活血中药生脉注射液联合血塞通注射液以及扶正化瘀胶囊也具有保护心肌缝隙连接和改善心肌纤维化的药理作用。综合以上结果，本项目阐述了以稳心颗粒为代表的益气活血中药改善心肌缝隙连接等心律失常的产生基质防治心梗后心律失常的作用特点。为中药防治心梗后心律失常提供了实验依据。