去卵巢大鼠成骨细胞CKI-CDK-Rb-E2F途径的改变及健骨颗粒的干预作用

CKI-CDK-Rb-E2F途径是由Cyclins、CDKs、CKIs、Rb、E2F等蛋白组成的细胞周期调节途径，其调节作用对增殖细胞的增殖周期尤其G1期进程至关重要。目前该途径对成骨细胞增殖的调节作用仍未被阐明。前期研究发现，成骨细胞中存在Cyclin D1、CDK4等蛋白，且中药健骨颗粒能提高其表达，促进成骨细胞增殖。本项目拟建立去卵巢绝经后骨质疏松大鼠模型及成骨细胞体外培养体系，用健骨颗粒进行干预，运用免疫组化、实时荧光定量PCR、Western blot等技术，检测模鼠及体外培养成骨细胞CKI-CDK-Rb-E2F途径中CyclinD1、Cyclin E、CDK4、CDK6、CDK2、Rb、E2F、p53、p21、p16等蛋白的表达，探索绝经后骨质疏松与成骨细胞CKI-CDK-Rb-E2F途径的关系，并从成骨细胞增殖周期调节途径方面探讨健骨颗粒有效治疗绝经后骨质疏松症的可能机制。

CKI-CDK-Rb-E2F途径是由Cyclins、CDKs、CKIs、Rb、E2F等蛋白组成的细胞周期调节途径，对增殖细胞的增殖周期尤其G1期进程至关重要。目前该途径对成骨细胞增殖的调节作用仍未被阐明。前期研究发现，成骨细胞中存在Cyclin D1、CDK4等蛋白，且中药健骨颗粒能提高其表达，促进成骨细胞增殖。本项目建立了去卵巢绝经后骨质疏松大鼠模型及成骨细胞体外培养体系，用补肾健脾中药健骨颗粒及雌二醇对骨质疏松大鼠与体外培养成骨细胞进行干预，运用免疫组化、实时荧光定量PCR等技术，检测成骨细胞CKI-CDK-Rb-E2F途径中Cyclin E、CDK2、E2F-1及p21等主要调节蛋白的表达，运用MTT法成骨细胞增殖，运用流式细胞术进行细胞周期分析。结果发现，去卵巢骨质疏松大鼠成骨细胞Cyclin E、CDK2 和转录因子E2F-1 蛋白表达降低，p21表达升高；而健骨颗粒与雌二醇一样能提高体内外成骨细胞Cyclin E、CDK 2和转录因子E2F-1的mRNA和蛋白表达，抑制负性调节因子p21的表达，提高成骨细胞的增殖指数与增殖速度。提示去卵巢骨质疏松大鼠成骨细胞CKI-CDK-Rb-E2F途径发生改变，增殖周期调控异常，成骨细胞增殖减缓，细胞周期阻滞增多；健骨颗粒能通过调节成骨细胞增殖周期调控机制——CKI-CDK-Rb-E2F途径，推进成骨细胞增殖周期进程，减少周期阻滞，促进成骨细胞增殖。从成骨细胞增殖周期调控的角度探讨了绝经后骨质疏松发病的细胞学机制以及健骨颗粒促进成骨细胞增殖的作用机理，将为进一步探索绝经后骨质疏松症的发病机制以及补肾健脾中药防治骨质疏松症的机制研究提供线索。