基于Rho/ROCK信号通路探讨成纤维细胞迁移在尿道瘢痕形成的作用及机制

The proliferation and migration of urethral submucosal fibroblasts toward mucous epithelium plays an important role in the formation of urethral scar. ROCK can adjust microfilament reconstitution in a variety of cells. Stimulating ROCK pathway promotes the formation of stress fiber and cell migration. Based on the discovery above, the subject is intended to study the role of Rho-kinase inhibitor fasudil in the formation of urethra scar, by establishing animal model of urethral trauma, urethral stricture after trauma and transurethral holmium laser internal urethrotomy after urethral stricture, by means of cytobiology and molecular biology. The influence of Rho/ROCK pathway on fibroblasts migration in the formation of urethral scar will also be explored．This subject will not only explore a new way to prevent urethral stricture recurrence after internal urethrotomy , but also focus on the pathogenesis of urethral stricture, and provide new theories and methods of the pathogenesis of a variety of fibrosis diseases.

尿道黏膜下成纤维细胞的增殖并向黏膜上皮迁移在尿道瘢痕形成过程中作用重要，ROCK可以调节包括多种细胞的微丝重构,激活ROCK依赖途径促进应力纤维的形成和细胞迁移。以上述发现为基础，本研究通过尿道创伤、创伤后尿道狭窄及尿道狭窄行尿道钬激光尿道内切开动物模型，通过细胞生物学、分子生物学手段研究Rho激酶抑制剂法舒地尔对尿道瘢痕形成的作用，探讨Rho/ROCK信号通路对尿道瘢痕形成中成纤维细胞迁移的影响。开展此项研究不仅可望为临床探讨一条预防尿道内切开术后尿道狭窄复发的有效便捷的新途径，而且将进一步揭示尿道瘢痕发病机理，为各种纤维化疾病的发病机制提供新的理论和方法。

尿道狭窄形成机制复杂，目前无论尿道狭窄的腔内治疗还是药物治疗对于尿道狭窄复发，尚未取得显著疗效，成为困扰泌尿外科医生最为棘手的问题之一。因此深入研究尿道瘢痕形成的机制，寻找一个有效的方法来预防尿道狭窄术后复发，是目前尿道外科的研究热点。本研究构建了尿道创伤后尿道狭窄及以狭窄后激光切开的新西兰兔动物模型，从体内体外对尿道瘢痕形成和发展机制进行研究。我们研究发现：Rho激酶抑制剂法舒地尔可以通过下调TGF-β1诱导的兔尿道成纤维细胞Rho/ROCK通路激活，抑制细胞外基质形成，减少尿道损伤后狭窄的发生；法舒地尔可以通过阻滞Rho/ROCK通路激活，进而抑制TGF-β1诱导的兔尿道瘢痕细胞增殖、胶原纤维合成，减少激光内切开治疗兔尿道狭窄的复发；法舒地尔通过Rho/Rock信号通路抑制TGF-β1诱导的尿道成纤维细胞的增殖、迁移、并抑制分泌细胞外基质合成，诱导尿道成纤维细胞早期凋亡；沉默LIMK1基因可下调Rho/ROCK信号通路关键蛋白p-Cofilin、α-SMA及I、III型胶原纤维蛋白表达，抑制成纤维细胞发生增殖和迁移，增强法舒地尔抑制兔尿道成纤维细胞增殖和迁移能力。本研究比较全面地阐明Rho/ROCK信号通路及Rho激酶抑制剂法舒地尔在尿道瘢痕形成中的作用，为尿道狭窄的预防和治疗提供了新的思路，其成果具有一定的理论意义和应用价值。