淫羊藿素通过调控肠道菌群毛螺菌科抑制前列腺癌恶性进展的探索性研究

Prostate cancer (PCa) is one of the most common male malignant tumors, its fatality rate ranks first among male tumors. Icaritin has been proved to obtain anticancer effect in varieties of cancers, but there are few reports in the study of PCa. Our previous studies found that Icaritin increased the survival rate of male TRAMP prostate adenocarcinoma transgenic mice, and inhibited the malignant transformation of PCa cells by regulating the PEA3/HER2/AR pathway. Using 16S rRNA sequencing technology, to analysis of the composition, species and quantity of intestinal microflora in TRAMP mice , we screened out 27 enteric bacteria which may have potentially affect onTRAMP mice. And in combination with the sequencing results of the macro transcriptome, we screened lachnospiraceae with a significant expression downregulation. At the same time, Icaritin intervened the co-culture model of mouse intestinal bacteria and PCa in vitro cell experiment, it can inhibit PCa cell proliferation and down-regulate the expression of lachnospiraceae with significant difference. The aim of this study is to research the target relationship between Icaritin and the regulation of intestinal microflora, and its impact on PCa to find new molecular mechanism.

前列腺癌（Prostate Cancer, PCa）是临床上最常见的男性恶性肿瘤之一，其致死率在男性癌症中占第一位。淫羊藿素在多种癌症中被证明具有抗癌作用，但在前列腺癌中的研究鲜有报道，并且对癌症的作用机制仍不明了。我们前期研究发现淫羊藿素提高雄性TRAMP前列腺腺癌转基因小鼠生存率，此外通过调控PEA3/HER2/AR通路，抑制前列腺癌细胞恶性转化。并且通过16S rRNA 测序技术分析TRAMP前列腺癌转基因鼠肠道菌群的构成，种类与数量，筛选出27个潜在影响前列腺癌鼠的肠道菌属，并且结合宏转录组测序结果筛选出表达量显著下调的毛螺菌科。同时体外细胞实验检测到淫羊藿素干预鼠肠道菌与前列腺癌共培养模型后，能够抑制前列腺癌细胞的增殖，下调差异显著肠道菌的表达量。本课题拟利用分子生物学方法协同体外、体内模型研究淫羊藿素调控毛螺菌科的靶向关系及其对前列腺癌的影响，挖掘前列腺癌发生发展的新分子机制。

前列腺癌是临床上最常见的男性恶性肿瘤之一。淫羊藿素在多种癌症中被证明具有抗癌作用，但在前列腺癌中的研究鲜有报道，并且对癌症的作用机制仍不明了。课题组研究发现淫羊藿素能够提高雄性TRAMP前列腺癌转基因小鼠生存率。此外通过调控PEA3/HER2/AR通路，抑制前列腺癌细胞恶性转化，并且通过16S rRNA 测序技术分析TRAMP前列腺癌转基因鼠肠道菌群的构成，种类与数量，筛选出27个潜在影响前列腺癌鼠的肠道菌属，并且结合宏转录组测序结果筛选出表达量显著下调的毛螺菌科。离体培养前列腺癌鼠肠道菌，与淫羊藿素共培养各组前列腺癌细胞，通过CCK-8、流式细胞、克隆形成、划痕和Transwell实验研究各组前列腺癌细胞的增殖、迁移侵袭、克隆形成和细胞周期等。实时定量 PCR 检测各组细胞中miR381-3P、UBE2C、PEA3 mRNA水平的变化，并且检测毛螺菌科等差异显著肠道菌的表达；免疫印记（Western Blot）技术分别检测各组细胞中UBE2C、PEA3蛋白定量表达的变化。. 此外课题组建立了高脂饮食诱导的肥胖前列腺癌 TRAMP 转基因小鼠模型（已申请发明专利），在此模型上观察到两种主要的脂肪因子瘦素和脂联素的血清水平变化，它们在高脂饮食介导的前列腺癌进程中起关键作用。在20周与24周时，接受淫羊藿素处理的实验组TRAMP小鼠中观察到血清瘦素水平显著降低，具有统计学差异。此外，在28周时，接受淫羊藿素处理的实验组小鼠的血清瘦素水平明显低于20和24周亚组。与瘦素结果相反，在20周时接受淫羊藿素处理的实验组小鼠中，血清脂联素水平显著增加，高脂饲料喂养的TRAMP小鼠相比对照组小鼠，肠道菌群阿克曼氏菌显著减少、肠道内容物中维生素K2显著减少，而口服补充阿克曼氏菌显著抑制TRAMP转基因前列腺癌小鼠肿瘤的生长、拮抗高脂饮食诱导的脂肪因子。. 本项目的特点在于阐明淫羊藿素能够抑制前列腺癌的进展，通过调控肠道菌群毛螺菌科发挥作用，对这一现象机制的进一步研究有助于深入阐述抑制前列腺癌进展的作用机制，为淫羊藿素预防前列腺癌的临床应用提供了依据。