山羊胚胎与子宫内膜细胞对uNK细胞活化和分泌表达的影响

子宫局部免疫－内分泌失调是引起胚胎附植异常，造成胚胎丢失的主要原因，在移植胚胎，尤其是核移植胚胎，免疫因素的影响更加突出。本研究以山羊永生化的子宫内膜细胞建立内膜细胞随生殖周期变化的体外模型，分别与孤雌激活胚、体细胞核移植胚和正常囊胚共培养，应用ELISA，western blot等检测内膜细胞LIF、IL-18和TGF-βs等分泌和表达的变化，进一步应用流式细胞术和ELISA等测定上述体系对uNK细胞活化和分泌活性的影响，以及对uNK细胞表达和分泌VEGF、IFN-γ的作用，揭示性腺激素和胚胎对子宫局部微环境的影响，阐明子宫内膜细胞在uNK募集与活化中的作用。对于深入了解子宫内膜细胞的免疫调节作用和uNK的来源与功能，揭示早期胚胎丢失的内分泌－免疫调节机制具有重要的理论意义；同时，对于提高家畜繁殖率、胚胎移植尤其是体细胞核移植胚胎的成功率具有潜在的应用价值。

子宫局部免疫-内分泌失调是引起胚胎附植异常，造成胚胎丢失的主要原因，在移植胚胎，尤其是核移植胚胎，免疫因素的影响更为突出。本研究以山羊永生化的子宫内膜上皮细胞（EEC）和基质细胞（ESC）建立随生殖周期变化的内膜细胞体外模型，分别与孤雌激活胚（PE）、体细胞核移植胚（SCNTE）和正常囊胚(IVE)共培养，应用ELISA，western blot等检测内膜细胞LIF、IL-18、TGF-β和TNF-α分泌和表达的变化，进一步应用流式细胞术和ELISA等测定上述体系对uNK细胞表型以及表达和分泌IFN-γ、VEGF的作用。结果表明：（1）E2或/和P4均可显著增强EEC中TGF-β、TNF-α及IL-18的分泌活性(P＜0.05)，对ESC中IL-18的分泌活性呈增强作用(P＜0.05)。在基于套皿共培养ESC与EEC体系中，性腺激素均显著降低EEC分泌TGF-β、TNF-α及IL-18活性；对ESC分泌TNF-α和LIF具有抑制作用。提示基质-上皮细胞互作对激素作用下子宫内膜细胞分泌活性的调节作用。（2）检测山羊胚胎与性腺激素对EEC与ESC共培养体系下的EEC分泌与表达功能的影响结果表明，在激素作用下，SCNTE组中TNF-α及IL-18分泌水平均较IVE及PE组高（P<0.05），而 LIF分泌水平则较IVE及PE组低（P<0.05）。表明不同类型胚胎对EEC中LIF、TNF-α及IL-18等分泌及表达水平具有不同调节作用。（3）性腺激素与胚胎作用下子宫内膜细胞体系对uNK细胞表型变化的研究表明，在激素作用各组中，SCNTE组中CD56+CD16-表型uNK细胞数量均显著低于IVE及无胚胎对照组；E2或P4单独作用下，SCNTE组中CD56-CD16+表型uNK细胞数量均显著高于IVE组；E2与P4共同作用下，SCNTE及IVE组中CD56-（CD56+）CD16+表型uNK细胞数量均显著低于无胚胎对照组。对uNK细胞分泌活性的研究表明，无论激素作用与否，SCNTE组中IFN-γ分泌水平均显著高于IVE及PE组（P<0.05），而VEGF分泌水平则显著低于IVE组（P<0.05）。提示不同类型胚胎对uNK细胞表型和分泌活性的不同调节作用。