基于TGF-β1/Smad通路探讨肾疏宁干预HBV诱导HK-2转分化的作用机制

Hepatitis B virus associated glomerulonephritis is the common secondary kidney disease in our country. And renal interstitial fibrosis is a milestone duri-ng its development process of the disease of pathology.During the process,tubu-lar epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) plays an important role.Research-es show that EMT is mainly related to TGF-β1/Smad signaling pathways whi-ch is a key pathway of renal interstitial fibrosis. Based on the famous TCM..Professor Huang Wenzheng’thought of Dysfunction of shaoyang,in the clinic we apply the method of "shulishaoyang "(Shenshuning) for the treatment of HBV-GN and have made good effect. And previous related research also confirmed that it can delay HK-2 transdifferentiation through suppressing the TGF-β1/Sm-ad pathway activation.Therefore,we propose a hypothesis that major molecular mechanism for the treatment of HBV-GN is intervening transdifferentiation of HK-2 to prevent renal interstitial fibrosist through repressing the TGF-β1/Smad pathway activation.We explore the transdifferentiation mechanism of HBV on HK-2 by vitro cytology and molecular biology methods ect, to clarify Shenshu-ning’s sepcific mechanism of action and targets on HBV-GN’treatment, to provi-de a scientific basis for the treatment of HBV-GN for Shenshuning.At the sam-e time,it can also provide a new method to prevent renal interstitial fibrosis r-elated with HBV.

乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）是我国常见的继发性肾炎，而肾间质纤维化是其疾病发展过程中所必经的病理途径，其中肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT）发挥着重要作用。而且研究表明，EMT主要与TGF-β1/Smad信号通路有关，为肾间质纤维化的关键通路。依据名老中医黄文政教授“少阳三焦枢机不利”理论，以“疏利少阳”法（肾疏宁）治疗HBV-GN，取得了良好效果。同时前期相关研究也证实其可通过阻抑TGF-β1/Smad通路来延缓HK-2转分化。故我们提出“通过阻抑TGF-β1/Smad通路活化来干预HBV诱导HK-2转分化进而防止肾间质纤维化，是肾疏宁治疗HBV-GN的主要分子机制”的假说。采用离体细胞学和分子生物学等方法，探索HBV-GN相关的HK-2转分化，阐明肾疏宁治疗HBV-GN的具体作用机制及靶点，为其临床应用提供科学依据，也为干预HBV诱导的肾间质纤维化提供了新方法。

乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）是我国常见的继发性肾炎，而肾间质纤维化是其疾病发展过程中所必经的病理途径，其中肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT）发挥着重要作用。本研究采用离体细胞学和分子生物学等方法，探索HBV-GN相关的HK-2转分化，一定程度阐明了肾疏宁治疗HBV-GN的具体作用机制及靶点，通过对TGF-β1/Smad 通路的相关细胞因子、肾小管上皮细胞转分化的标志蛋白、EMT 相关蛋白以及细胞迁徙能力的检测，以及建立三组不同浓度肾疏宁含药血清及生理盐水含药血清，并设立贝那普利含药血清、Smad 抑制剂两组阳性对照组，对HBV 转染6h 后的HK-2 细胞进行干预。研究发现，干预48h 后，肾疏宁高剂量含药血清、贝那普利含药血清、Smad 抑制剂可以抑制HBsAg 的表达，对HBeAg的表达虽然肾疏宁高剂量含药血清有一定的抑制趋势，但统计学差异不明显。肾疏宁可以通过抑制TGF-β1/Smad 通路的TGF-β1 因子、pSmad2 蛋白、pSmad3 蛋白的表达，以及下调ColⅢ、ColⅣ、FN 而抑制HK-2 细胞EMT 的发生，说明肾疏宁有可能延缓肾间质纤维化的作用。对于间充质细胞的标记蛋白α-SMA，肾疏宁对其有明显的抑制作用；对于肾小管上皮细胞间粘性连接蛋白E-cadherin，肾疏宁对其有上调趋势，但统计学差异不明显。HBV 诱导HK-2 细胞发生转分化，可以导致上皮细胞表型发生转化，上皮细胞间的黏性连接蛋白减少，细胞的迁移能力明显增强，而肾疏宁可以抑制细胞的迁徙能力，延缓肾间质纤维化的进程。综上，肾疏宁可以通过TGF-β1/Smad 通路干预HBV诱导的HK-2 细胞发生转分化，进而延缓肾间质纤维化的进程。