体细胞克隆胚胎中心体异常的分子机制研究

中心体作为主要微管组织中心，是确保有丝分裂纺锤体的正确装配和染色体正常分离的必要条件；中心体异常将导致胚胎细胞的染色体异倍，胚胎发育停滞。研究发现，47％克隆胚胎存在中心体异常，但对体细胞克隆胚胎的中心体异常的机制了解得还很少；P53和CDK2激酶在细胞中心体复制过程中具有重要调控作用。本研究首先采用免疫荧光标记和荧光定量RT-PCR方法，检测P53和CDK2在中心体复制异常的克隆胚胎中的分布和表达水平，以正常胚胎为对照，揭示其异常规律；然后利用RNA干涉、抗体注射、过表达和激酶活性分析技术，对CDK2蛋白表达异常导致胚胎中心体异常的功能进行验证，阐明体细胞克隆胚胎中心体异常复制的分子机制，揭示克隆胚胎染色体异常、发育停滞和妊娠失败的产生原因，以便针对性地改善克隆胚胎的体外发育，提高克隆效率。